《表2 PRR11自激活检测结果》

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《基于酵母双杂交技术的PRR11相互作用蛋白筛选与初步分析》

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将所构建好的质粒按照表1组合转入到膜酵母菌NMY32中，通过酵母双杂交系统进行自激活和功能检测。表1为酵母转化培养4 d后的每块板上的克隆数以及每个转化反应在缺陷平板上的转化子数量和生长率。如表2、图2所示，反应1为阳性对照，因为APP-bait和Fe65-prey具有强相互作用，故可在SD-TLH和SD-TLHA筛选平板上生长旺盛。反应2为阴性对照，在筛选平板上的生长率为0。反应5和6为酵母双杂交系统的功能检测，其生长率为58%～67%，表明诱饵蛋白在酵母菌中能正确表达并产生功能。反应3和4为检测诱饵蛋白pBT3SUC-PRR11和pBT3STE-PRR11的自激活作用，在SD-TLH和SD-TLHA筛选平板上，转化了2种诱饵蛋白的酵母菌分别具有一定的生长率，表明PRR11诱饵蛋白有自激活作用。因此，有必要构建突变体以消除PRR11的自激活作用。