《表1 HIF-1α和MVD在IBC-NST和正常乳腺组织中的表达差异》

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《缺氧诱导因子-1α与非特殊型浸润性乳腺癌分子分型及血管生成的关系分析》

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Eli Vision免疫组化检测二步法主要步骤如下:乳腺癌组织经4%中性甲醛固定、石蜡包埋组织以3～4μm厚度切片并贴于防脱玻片，经脱蜡、水化及抗原修复后，以3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，滴加一抗，室温孵育60 min，滴加聚合物增强剂，室温孵育20 min，滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温孵育30 min，再经DAB显色，苏木精衬染，脱水干燥及封片后置于普通光学显微镜下观察。另检测正常乳腺组织HIF-1α、CD34的免疫组化表达情况作为对照。各项指标检测过程中均以已知阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。HIF-1α结果判定采用半定量法:将定位于IBC-NST细胞核的染色按深浅评分，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；再对整张切片中着色IBC-NST细胞占IBC-NST细胞总数的比例评分，着色细胞<5%为0分，着色细胞≥5%且<10%为1分，着色细胞≥10%且<50%为2分，着色细胞≥50%为3分；两项得分乘积≥4为HIF-1α阳性表达；正常对照组乳腺细胞核HIF-1α表达情况参照此法判读。IBC-NST组织HER2免疫组化结果判读根据2018年ASCO/CAP发布的检测指南[5]，将3+（10%以上浸润性癌细胞呈强且完整的细胞膜染色）定义为HER2阳性；2+（10%以上浸润性癌细胞呈弱到中等强度的完整细胞膜染色）为结果不确定，需进一步荧光原位杂交法（Fluorescence in situ hybridization，FISH）检测HER2基因扩增情况后再判定阳性或阴性；1+及0则定义为HER2阴性。ER和PR表达结果的判读根据2010年ASCO/CAP发布的乳腺癌ER、PR免疫组化检测指南[6]，评估整张切片中ER或PR阳性的IBC-NST细胞数占IBC-NST细胞总数的百分比，当≥1%的IBC-NST细胞核呈现不同程度的ER或PR着色时，即为ER或PR阳性。Ki67结果判读方法参照2011年国际乳腺癌Ki67工作组共识[7]:选取切片中IBC-NST细胞核Ki67表达率高的热点区，于高倍视野下评估Ki67阳性的IBC-NST细胞数占IBC-NST细胞总数的百分比，观察3个以上高倍视野（计数500个以上IBC-NST细胞），取平均值作为Ki67表达指数。CD34结果判读参照Weidner标准[8]:IBC-NST组织内CD34细胞浆着色的单个血管内皮细胞或细胞簇，不论是否形成管腔，均代表1个微血管，但管径大于8个红细胞直径的血管不作为计数，选择5个富于微血管的热点区，在200倍视野下计数每个视野中的微血管数量，取平均值作为微血管密度（Microvessel density，MVD）；正常对照组MVD参照此法判读。