《表2 蛋白免疫印迹所用抗体信息》

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《PM_(2.5)长期暴露诱导对人支气管上皮细胞上皮间质转化行为的影响》

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收集暴露结束后对数生长期的HBE细胞提取总蛋白，并按照BCA蛋白定量试剂盒的操作说明，使用酶标仪在562nm处检测每孔的吸光度，绘制标准曲线，并计算蛋白样品浓度．使用RIPA (rapid immuno precipitation assay）裂解液调整蛋白浓度，进行蛋白表达水平检测．配制十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶，每条泳道加入蛋白样品总量为30μg，凝胶两端预留两条泳道加入5μL蛋白分子质量标准，用1×SDS上样缓冲液补齐体积；60V恒压电泳30min，待样品通过积层胶进入分离胶后，调至90V恒压直至条带迁移到凝胶底部边缘，最后取出凝胶于70V恒压下转聚偏氟乙烯（PVDF）膜4h；转膜结束后，按照预测蛋白分子质量将PVDF膜进行裁剪，放入5%（质量分数）脱脂奶粉（封闭液）中，室温摇床孵育1h；随后进行抗体特异性结合，抗体信息如表2所示；最后进行显影曝光．