《表1.嗜虫耶尔森氏菌 (CSLH88) 的抗性结果》

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《嗜虫耶尔森氏菌HlyA及HasA外分泌表达系统的构建》

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通过PCR得到kan基因片段，预期大小为1096 bp，可以在电泳图上观测到其1000 bp左右的扩增条带（图2-A）。在Sph I处对pUC19-nptII-GFP-HlyA外分泌表达载体进行线性化处理后，用In-Fusion克隆连接体系构建pGHKW2重组质粒。该重组质粒以pUC19载体为基本骨架，含nptII启动子，gfp基因、kan抗性基因以及HlyA、HlyB、HlyD三个外分泌系统构件（图3），大小为9425 bp。对构建的阳性克隆质粒用Sac I、Spe I进行双酶切验证，预期得到片段大小分别为5666 bp和3759 bp，与电泳图条带大小大致相符（图2-B）。测序验证结果与设计条带序列相符，证明pGHKW2分泌表达载体构建成功。同样的方法对pUC19-nptII-GFP-HasA外分泌表达载体进行处理，构建pGHKW4重组质粒。该重组质粒以pUC19载体为基本骨架，含nptII启动子，gfp基因、Kan抗性基因以及HasA这一外分泌系统构件（图3），大小为5494 bp。用Sac I、Xma I进行双酶切，预期得到片段大小分别为1142 bp和4352 bp，与电泳图条带大小大致相符（图2-C）。测序验证结果与设计条带序列相符，证明pGHKW4分泌表达载体构建成功。后续将验证得到的质粒序列提交到GenBank中，获得pGHKW2的序列登陆号为MK562405，pGHKW4的序列登陆号为MK562404。