《表2 T-RFLP上样体系》

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《应用T-RFLP技术分析不同土壤温度和施肥方式下设施土壤细菌群落结构》

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3) T-RFLP分析。用绿豆酶（Mung bean nuclease，TaKaRa）在30℃下硝化PCR产物35 min，50μl硝化反应体系包含5μl 10×绿豆酶buffer，0.1μl绿豆酶和45μl PCR产物；然后用PCR产物纯化试剂盒（Axygen）纯化硝化后的产物；接着用限制性核酸内切酶HhaⅠ（TaKaRa）酶切硝化纯化后产物，37℃酶切硝化3 h，此时10μl酶切反应体系中包含1μl 10×buffer、1μl Hha I、8μl纯化后产物、0.5μl去离子水。上样体系剂量及电泳条件见表2。对于细菌，由于相对数量过小的限制性末端片段（T-RFs）不会对群落的特性产生明显的影响[10]，故在本研究中舍去了相对数量<1%的T-RFs，然后分别计算图谱中每一个峰的峰面积与所有峰总面积的比值。