《表1 耐药基因标准曲线》

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《牛粪发酵过程中抗生素耐药基因及相关菌群组成变化规律》

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采用实时荧光定量PCR（Bio-rad i Q5 real time PCR dectection system，USA）对抗生素耐药基因进行检测。检测耐药基因包括sul1[11]，erm B[12]，bla CTX-M[13]，tet M[14]，aac（6'）-Ib-cr（F-5'-CACCGGAAA-CATCGCTGCA-3'；R-5'-AAGTTCCGCCGCAAG-GCT-3'）。检测主要参照Chen等[15]和Zhu等[13]的方法，按以下反应体系进行:10μL SYBR Premix Ex TaqTM，上、下游引物各0.2μmol L-1，1μL模板，加ddH2O补至20μL。反应条件:95℃变性5 min；95℃10 s，60℃20 s，72℃30 s，共40个循环；荧光采集72℃；熔点曲线温度设定范围为60℃～95℃。每个DNA样品重复3次。耐药基因标准曲线见表1。