《表7 引物微调试验 (μL)》

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《铁皮石斛及霍山石斛ISSR鉴定体系的建立与优化》

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通过单因素试验确定ISSR反应体系每个组分的最佳用量。以UBC834为引物，铁皮石斛的基因组DNA为模板，分别以2×Taq Master Mix（表2）、引物（表4）、DNA作为单因素（表6），再根据单因素试验结果设计2×Taq Master Mix微调试验（表3）及引物微调试验（表7），反应体系为20μL。ISSR-PCR扩增程序为：（1）94℃预变性5 min；（2）94℃变性0.5 min；（3）52.2℃～56℃退火0.5 min；（4）72℃延伸0.75 min，共40个循环；（5）最后72℃继续延伸10 min，4℃保存。