《表1 引物序列:干旱对转AtCuZnSOD基因羽衣甘蓝种子萌发和幼苗生长的影响》

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《干旱对转AtCuZnSOD基因羽衣甘蓝种子萌发和幼苗生长的影响》


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转AtCuZnSOD基因植株检测采用PCR法;Southern blot杂交方法是取25μg阳性转化植株和野生型植株叶片总DNA经EcoRI完全消化后,采用1%的琼脂糖凝胶电泳进行分离,探针以35S启动子基因与目的基因模板经PCR扩增的1 360的片段,采用随机引物法进行标记[19]。转基因植株在盐胁迫下的表达量检测采用qRT-PCR法[20]。相对定量公式:ΔΔCt=ΔCt(试验样品)-ΔCt(基准样品)计算,其中:ΔCt(试验样品)=Ct(试验样品,目的基因)-Ct(试验样品,内参基因);ΔCt(基准样品)=Ct(基准样品,目的基因)-Ct(基准样品,内参基因);相对表达量=2-ΔΔt;目的基因相对表达量=试验样品表达量-WT样品表达量。试验所用引物列于表1。所有研究于2016年8月至2018年7月在黄淮学院园林中心实验室及温室大棚内进行。所有试验都包括至少3个生物重复,并用Duncan-test对数据进行差异分析。