《表1 引物序列:小鼠肺内β-防御素-2下降在重症甲型H1N1流感中的诊断价值》

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《小鼠肺内β-防御素-2下降在重症甲型H1N1流感中的诊断价值》


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取小鼠右侧肺组织,加入1 ml DMEM,应用电动匀浆器进行匀浆。4 000 r/min(离心半径14 cm)离心10 min,取上清液。取40μl肺组织匀浆,进行RNA提取(根据qiagenRNA提取试剂盒说明书进行)。取RNA 8μl进行逆转录(根据invitrogen逆转录试剂盒说明书进行),逆转录反应条件:65℃5 min,25℃10 min,50℃50 min,85℃5 min,37℃20 min。PCR反应:94℃预变性5 min,94℃变性60 s,60℃退火60 s,72℃延伸60 s,进行35个循环,最后延伸7 min。取5μl PCR产物(见表1)与1μl上样缓冲液混匀后,加入1.5%的含溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳孔中,最后加入5μl DNA分子标记物,打开电泳仪,先80 V 5 min,再90 V 35 min,电泳完毕后,放入凝胶成像系统,进行拍照。