《表4 本研究所用的质粒：番茄红素合成基因组合优化和产物测定》

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《番茄红素合成基因组合优化和产物测定》

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番茄红素表达质粒构建:首先以p Y26-GPD-TEF质粒为模板，用引物PY26-F、PY26-R反向扩增，Nco I/Nhe I双酶切后纯化得p Y26载体片段；同时以含kan基因质粒p ET28 （a）+为模板，用引物Kan-F、Kan-R扩增，Nco I/Nhe I双酶切后纯化得kan基因，将二者所得产物16℃连接6 h后转化E.coli JM109，菌落PCR验证正确后测序确认。然后将质粒醋酸锂转化酿酒酵母YPH499△gal80，涂布于YPD （添加500 mg/L G418）平板上30℃倒置培养，2～3 d后平板上长出转化子表明kan抗性基因的功能性存在，成功将原始p Y26-GPD-TEF质粒的筛选标记替换为KanMX，命名为p Y26-kan，作为番茄红素合成基因表达的骨架质粒。接着Bgl II/Not I双酶切p UC57-CrtI、p Y26-kan质粒后，纯化产物并16℃连接6 h后转化E.coli JM109，菌落PCR验证正确后测序确认（pY26-CrtI）。最后Bam H I/EcoR I双酶切p UC57-CrtB、p Y26-CrtI质粒后，纯化产物并连接转化E.coli JM109，菌落PCR验证后测序确认，构建pY26-McCrtB-BtCrtI等16个不同组合的番茄红素表达质粒（表4）。