《表4 人参总皂苷对PC12衰老细胞中Bcl-2、Bax、Cyt-C蛋白表达的影响（±s,n=3)》

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《人参总皂苷对D-半乳糖致PC12细胞衰老的改善作用及其机制研究》

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注：与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

采用Western blotting法检测。按“2.4”项下方法分组、培养。培养24 h后，在冰浴条件下，用RIPA裂解液提取细胞总蛋白。按线粒体细胞分离试剂盒操作说明书提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，于沸水中加热8 min变性。取适量变性蛋白进行SDS-PAGE，转膜0.5 h，5%脱脂奶粉室温封闭1.5 h，在4℃条件下加入Bcl-2、Bax、Cyt-C、CoxⅣ、GAPDH一抗（稀释比例为1∶1 000)，4℃孵育过夜；用PBST溶液洗涤3次（每次5 min），再加入二抗（稀释比例为1∶10 000），室温孵育1 h，用PBST溶液洗涤3次（每次5 min）。加入特超敏ECL化学发光试剂显色，于凝胶成像系统上成像，采用J 1.52a Image软件分析，分别以Bcl-2、Bax与内参GAPDH的灰度值比值表示细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达水平，以Cyt-C与GAPDH的灰度值比值表示胞浆内Cyt-C蛋白的表达水平，以Cyt-C与CoxⅣ的灰度值比值表示线粒体内Cyt-C蛋白的表达水平。试验重复3次。结果，与正常对照组比较，模型组细胞内Bcl-2和线粒体内Cyt-C蛋白的表达水平均显著降低，细胞内Bax和胞浆内Cyt-C蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，人参总皂苷低、高浓度组细胞内Bcl-2和线粒体内Cyt-C蛋白的表达水平均显著升高，细胞内Bax和胞浆内Cyt-C蛋白的表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01），详见图6、表4。