《表1 引物设计:核酸检测与抗体检测在艾滋病诊断中的价值》

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《核酸检测与抗体检测在艾滋病诊断中的价值》


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(1)裂解、稳定和去蛋白:加入裂解液,使检测样品完全裂解,释放DNA及RNA,同时被稳定。利用蛋白酶消化降解抑制蛋白,在高盐和还原剂去污剂作用下,核酸酶失活。(2)核酸捕获:采用磁珠法提取核酸,将磁珠上标记特异性吸附核损的物质特异性吸附核酸;在37°C及高盐、高去污剂和低p H条件下,总核酸被吸附到磁珠颗粒(MGP)的硅胶表面。(3)冲洗:借助洗液,将未结合的杂质及成分(变性蛋白、可能的PCR抑制成分、细胞碎片)去除,同时降低盐分浓度。(4)洗脱:在80°C、高p H及低盐条件下,将纯化的核酸从硅胶表面洗脱下来。(5)实时荧光定量PCR:在PCR反应体系中加入荧光基团,借助荧光信号的变化,对PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化进行实时检测,并利用标准曲线、Ct值分析对起始模板进行定量分析;与相对分子质量标准进行比较,判断扩增片段受否在预期的相对分子质量范围内,引物设计见表1。