《表3 各组ADSCs三系诱导分化相关基因的m RNA表达数据》

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《不饱和脂肪酸对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响》

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注:与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

为了进一步验证油酸或亚麻酸培养是否对细胞的分化能力产生影响，我们对各组细胞进行了成软骨、成骨及成脂诱导和染色鉴定（图5），并从分子水平检测了三系分化诱导培养9 d后相关标志基因的m RNA表达水平。ADSCs在成软骨诱导体系中诱导14 d后，细胞团逐步形成一个密实且有弹性的乳白色小球，阿利新蓝染色结果显示软骨细胞团呈蓝色。与对照组相比，油酸组及亚麻酸组诱导形成的软骨细胞团体积较大，形态较完整。Q-PCR检测结果显示，油酸组及亚麻酸组的成软骨标志基因SOX9和COL2A1的m RNA表达水平较对照组显著增高（P<0.05，图6A～B）。细胞在成骨诱导液中诱导14 d后，茜素红染色可见密集的细胞间散在大量的染为橘红色的矿化结节，说明诱导后细胞周围有明显钙沉积。其中，亚麻酸组生成的矿化结节稠密且染色最深，油酸组次之，而对照组生成的矿化结节面积较小且分散。Q-PCR检测结果显示，油酸组或亚麻酸组的成骨标志基因ALP、OCN及RUNX2的m RNA表达水平较对照组显著增高（P<0.05，图6C～E）。细胞经成脂诱导7 d后进行油红O染色，显微镜下可见细胞内脂滴呈鲜红色且边界清晰。在油酸或亚麻酸增殖培养后的ADSCs内脂滴的大小和数量均呈现增加的趋势，且成脂标志基因PPAR-γ的m R-NA表达水平较对照组有显著增加（P<0.01，图6F）。实验结果表明油酸或亚麻酸能促进ADSCs的三系分化能力。此外，从表3的数据可得出，与成软骨及成脂相关基因的表达水平相比，油酸或亚麻酸对ADSCs成骨分化能力的促进更为显著。