《表2 本研究所用质粒和菌株》

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《水飞蓟来源黄酮3-羟化酶鉴定及黄杉素发酵优化》

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使用引物F3H-F/F3H-R扩增Contig68823，获得的基因命名为Sm F3H。将扩增得到的序列插入到T载体中，得到p MD-T-Sm F3H。以p MD-T-Sm F3H、p MD-T-GAL7和T载体为模板分别扩增，将PCR产物经Gibson组装后获得p MD-G7Sm F3H、p MD-G7Sl F3H。使用Bsi WⅠ/PacⅠ对p MD-G7Sm F3H和p MD-G7Sl F3H进行双酶切，将得到的片段分别连接到p Y26-THGR的Bsi WⅠ/PacⅠ酶切位点，依次获得p Y26-THGRGF和p Y26-THGRGF2。将p Y26-THGRGF/p Y26-THGRGF2转化至菌株C800中，得到菌株C800THGRGF和C800THGRGF2。将菌株进行发酵验证，以柚皮素为底物，检测黄杉素的产量。本节所用菌株和质粒见表2。