《表2 赋值:CYP2D6基因分型与羟考酮给药间期末疼痛的相关性研究》

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《CYP2D6基因分型与羟考酮给药间期末疼痛的相关性研究》


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注:▲采用参考文献原文中引物的名称。

参考相关文献[12-13],采用等位基因特异性长PCR法(XL-PCR)检测CYP2D6*5(基因缺失)。引物5'2D6*5与3'2D6*5可特异性鉴定CYP2D6*5(3.5 kb),以DPKup与DPKlow作为内参引物。PCR体系包括:50~100ng DNA、1X Hieff?Long Taq master mix(Yeason,10107ES62)、0.4μmol·L-1引物。扩增程序:94℃2min;95℃20 s,68℃5 min,共30个循环;68℃7min。PCR产物用0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定。其他基因型的鉴定采用PCR加高通量测序法:长片段PCR扩增整个CYP2D6基因(5 kb)并纯化(所用引物DPKup与DPKlow见表1,扩增条件同*5鉴定时所采用的条件);采用DNA建库试剂盒(BIOO)制备NGS文库;NGS于Illumina Nova Seq 6000测序平台测序。数据经BWA比对到hg19基因组,samtools分析rs1065852、rs28371699、rs1058164、rs5030865、rs3892097、rs267608296、rs5030656、rs28371725、rs1135840的多态性;基于https://www.pharmvar.org/gene/CYP2D6数据进行CYP2D6*2、*4、*5、*9、*10、*14、*21、*36、*41、*69的分型。其中*1、*2为正常功能型(normal function),*9、*10、*14B、*41为功能降低型(decreased function),*4、*5、*14A、*21、*36、*69为非功能型(no function)。