《附表引物设计表:miR-145-5p靶向MEST抑制胃癌上皮细胞增殖侵袭转移的研究》

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《miR-145-5p靶向MEST抑制胃癌上皮细胞增殖侵袭转移的研究》


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根据制造商的说明(Thermo Fisher),使用mir Vana TM RNA分离试剂盒分离样品中的总RNA。使用Prime Script mi RNA c DNA合成试剂盒(D350A;Ta Ka Ra Biotechnology Dalian Co.Ltd.Dalian,People’s Republic of China)进行逆转录。使用基因特异性引物和SYBR Premix Ex Taq试剂盒(DRR081A;Ta Ka Ra Biotechnology Dalian Co.Ltd.)在MX3000P系统(Stratagene,La Jolla,CA,USA)上进行q RT-PCR。使用Primer 5.0软件(PREMIER Biosoft International,Palo Alto,CA,USA)设计候选基因的引物,引物设计见附表。PCR条件如下:初始变性(95°C,4min),然后在95°C变性40个循环(每个循环10s),在60°C退火30s,最后在72°C下延长30s。使用2-ΔΔct方法计算相对表达水平。U6和GAPDH用作内部参照,用2-ΔΔCt方法分析mi R-145-5p和MEST的表达。所有实验均重复3次。