《表1 引物序列：痛泻要方对肝郁脾虚型IBS-D患者的临床疗效及其机制》

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《痛泻要方对肝郁脾虚型IBS-D患者的临床疗效及其机制》

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（1）血浆脑肠肽含量变化观察，取两组患者于治疗开始前及4周治疗结束3 d内晨起空腹静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组治疗前后血浆脑肠肽中血管活性肠肽（VIP），降钙素基因相关肽（CGRP）含量的变化。ELISA检测CGRP试剂盒（上海西塘生物科技有限公司，批号1004101)，VIP（南京建成生物工程研究所，批号1804071）。（2）肠道菌群定量检测，治疗开始前及4周治疗结束3 d内采集患者新鲜粪便，于4℃环境保存，菌群测定参照相关文献操作，使用TIANamp Stool DNA Kit试剂（天根生化科技有限公司，批号DP328-2）提取粪便DNA，以β-肌动蛋白（β-actin）为内参，PCR引物用Prime 5.0软件设计，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。将患者粪便标本中所的DNA进行实时荧光定量PCR反应（SYBR Premix Ex TaqⅡ购自大连Takara公司，批号RR820A；采用美国Thermo Fisher公司PIKORed 96型实时荧光定量仪检测），反应条件：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，退火温度（大肠埃希菌53℃，粪链球菌51.8℃，嗜酸乳杆菌52℃，双歧杆菌53.5℃）退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃复性5 min。所有标本均留平行复孔以减小误差。将检测结果中的粪便标本拷贝数转换粪便细菌基因组的平均湿重，最终结果以log10（拷贝数/g）表示菌群数量。