《表2 粪肠球菌来源的信号肽》

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《组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建》

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根据文献[22]提供的粪肠球菌来源的信号肽（s1～s8）的基因序号，在美国国立生物技术信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）中找出粪肠球菌中信号肽的氨基酸序列和对应的基因序列，其中氨基酸序列的具体信息见表2。采用化学全合成方法[18]合成包含限制性酶切位点Nco I和Xho I以及信号肽碱基序列的DNA片段：5'-AGCCATGG（Nco I）-信号肽碱基序列-CTCGAG(Xho I）TG-3'。所合成的DNA片段经Nco I和Xho I双酶切，连接至经相同双酶切处理的载体p SIP401Z-gtamyhds，构建信号肽筛选质粒p SIP401Z-（s1～s8）-gtamyhds。将连接产物转化至E.coli JM109感受态细胞，并涂布于含200μg/m L红霉素的LB固体平板上，37℃过夜培养。挑取LB固体平板上转化子，提取重组质粒。将重组质粒送至上海生工生物工程股份有限公司进行测序，并与对应基因序列进行BLAST比对确认。