《表4 子代鼠各基因型数量统计》

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《利用CRISPR/Cas9技术构建Bpi基因敲除小鼠》

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显微注射后，收获了64枚受精卵，将这些卵移植至2只见栓代孕ICR雌鼠的双侧输卵管膨大部。待其生产后，共获得F0代仔鼠22只，对其进行基因型鉴定和DNA测序后，选取一只单链缺失708 bp碱基的阳性首建鼠3号雄鼠，其PCR鉴定结果及T-A克隆测序峰图如图6所示。将3号杂合子阳性首建鼠与C57BL/6野生型小鼠进行交配，所得8只F1代仔鼠基因型PCR鉴定结果如图7所示，突变型小鼠电泳结果在550 bp位置出现清晰条带，且测序结果分析得出同样碱基缺失708 bp，证明该缺失可被稳定遗传（在F和R一对引物用于杂合子小鼠的鉴定过程中，由于PCR条件的原因出现1258 bp野生型条带的情况是偶然性的，说明F和R这对引物不适合用于杂合子小鼠的野生型鉴定，故单独设计WT-R用来做野生型鉴定）。F1代杂合子小鼠间进行近交。出生的11只F2代小鼠中，有4只小鼠出现清晰突变型条带，并且未出现野生型条带，且PCR扩增产物测序结果表明同样碱基缺失708 bp，证明成功获得F2代Bpi基因敲除纯合子小鼠，基因型PCR鉴定结果如图8所示，F1代和F2代小鼠基因型总数统计结果如表4所示。