《表1 猪口蹄疫病毒引物和xTAG标签》

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《猪口蹄疫病毒MFIA xTAG检测方法的建立》

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2）质粒标准品制备。用天根的核酸自动抽取仪提取猪口蹄疫病毒的RNA/DNA为模板，使用表1中的引物，进行RT-PCR扩增，将扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳检测并切胶纯化[2]。用TaKaRa公司的试剂盒将纯化后的cDNA连接至pMD-19T载体中，将连接产物转化至DH5a感受态细胞，挑选单克隆，进行菌落PCR鉴定，将鉴定为阳性菌的菌落进行质粒抽提，并对阳性重组质粒测序验证。用质粒提取试剂盒（OMEGA公司）提取质粒，微量紫外分光光度计测定浓度与纯度，根据下面的公式计算拷贝数。拷贝数（copies/μL)=6.022×1 023(copies/moL）×DNA浓度（g/μL）/质量MW(g/moL）。其中，MW=DNA碱基数（bp）×660 daltons/bp，DNA碱基数=载体序列碱基数+插入序列碱基数。