《表1 Ⅰ类整合子及可变区引物序列[16]》

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《碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的耐药机制及其与Ⅰ类整合子的相关性研究》

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采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术检测Ⅰ类整合子。（1）制备DNA模板。参考提取细菌DNA试剂说明书提取细菌DNA，使用超微量分光光度计检测模板纯度，A260/A280在1.7～1.9，于-20℃冰箱中保存备用。（2）扩增整合酶基因。PCR反应体系为25μL，Premix Ex Taq 12.5μL，模板DNA 0.7μL，上下游引物各0.8μL（引物序列见表1[16]），RNase Free dd H2O10.2μL；配置反应体系在冰上进行，以减少核酸降解。反应条件:95℃预变性5 min，95℃变性30 s，52.5℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环，72℃延伸10 min。扩增后产物经1.5%琼脂糖凝胶在100 V恒压下电泳30 min，经凝胶成像仪扫描后观察结果。