《表1 RORγt测序引物》

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《甲氨蝶呤治疗对类风湿性关节炎患者RORγt基因甲基化水平和Th17/Treg平衡的影响》

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使用快速DNA提取检测试剂盒说明书提取患者Th17细胞中的DNA，按照DNA重亚硫酸盐转化试剂盒（天根生化科技有限公司，货号DP215）说明书转化和纯化DNA。在GenBank中查找RORγt的基因序列，并通过Methprimer在线甲基化引物设计软件，进行CpG岛的查找分析及亚硫酸氢盐处理后测序引物设计（表1）。按照甲基化转化试剂盒（QIAGEN公司，货号59104）对全基因组DNA进行甲基化修饰后使用PCR进行扩增并对扩增产物进行测序，而后标记CpG位点，分析目标基因甲基化水平。