《表4 用于遗传多样性分析的50对引物》

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《41份非洲和湖北蚕豆种质资源SSR遗传多样性分析》

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选取50对引物（表4）。PCR反应总体系为15μL，其中上下游引物各0.6μL，模板DNA为1.5μL，dd H2O为10.2μL，dNTP为0.4μL，10×Buffer为1.5μL。PCR扩增在TGreat Gradient Thermal Cycler（96Well）OSE-GP-01型PCR仪上进行，盖温控制在105℃，先95℃恒温预变性5 min；再进行35个循环的预变性（95℃30 s）、退火（温度随引物而不同30 s）、延伸（72℃45 s）；然后在72℃下继续延伸10 min；最后慢慢冷却至4℃。扩增产物加1/2体积的变性剂（5×TBE 10 m L，甲酰胺90 m L，溴酚蓝0.05 g，二甲苯青0.05 g），95℃恒温变性5 min取4μL利用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染检测，相机拍照记录结果。