《表1 浸提液细胞毒性形态学定性分级》

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《评价医疗器械体外细胞毒性的常用方法概述》

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（1）使用含血清培养基将实验样本、阴性对照和阳性对照分别在（37±1）℃浸提（24±2）h，制备出实验样本浸提液、阳性对照浸提液和阳性对照浸提液（阳性对照可选用5 g·L-1苯酚溶液，阴性对照可选用高密度聚乙烯）。（2）将试验样本浸提液和阳性对照浸提液稀释，分别得到至少4个浓度梯度的样本浸提稀释液和阳性对照浸提稀释液（浓度梯度可以为1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，或1∶1，1∶5，1∶25，1∶125，或1∶1，1∶10，1∶100，1∶1 000）。（3）将0.1 ml密度为1×105/ml-1个细胞的细胞悬液加入96孔组织培养微量滴定板孔中，在37℃，95%空气，5%CO2，>90%湿度培养箱中进行细胞培养24 h，以形成近汇合单层（近汇合为细胞在对数生长期末，约80%的细胞汇合）。（4）吸出96孔板中的培养基，将0.1 ml分别含有不同浓度的实验样本稀释液、阳性对照稀释液、阴性对照浸提液的培养基及常规培养基加入96孔板（每组至少8个孔）。细胞在37℃，95%空气，5%CO2，>90%湿度培养箱中进行细胞培养24 h。（5）在相差显微镜下观察每个板，记录不同组细胞的形态学差异。（6）镜下观察后移除孔板中的培养基，将50μl MTT溶液加到每个孔板中，将平板在37℃培养箱中孵育2 h。（7）弃去MTT溶液，每孔加入100μl异丙醇溶液。振荡平板，置于配置570 nm滤光片的光度计上测定吸光度。存活率（%）=100×OD570e/OD570b，OD570e为试验样品100%浸提液光密度平均值；OD570b为空白光密度平均值。如存活率<空白的70%，则具有潜在的细胞毒性。（8）在GBT16886.5-2017/ISO10993-5:2009中给出了以下表格（见表1）进行实验样本分级。