《表1 重组痘病毒经常使用的报告基因》

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《纯化痘病毒筛选的常用方法》

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但重组痘病毒的构建具有一定难度，主要原因是痘病毒不易产生同源重组现象，其概率一般<0.01%[6]，所以应加强对重组痘病毒的筛选，以实现重组痘病毒的纯化。1982年Mackett对痘病毒进行了深入研究，完成了重组病毒的构建。为有效分离和筛选重组病毒，很多学者采用不同的方法实现了重组病毒的筛选，如抗生素、胸苷激酶（TK）表型、噬斑形态、颜色标记、CRISPR等（表1）。对于标记了如GFP、EGFP、LacZ、GPT、tomato red等报告基因的重组痘病毒，可通过荧光显微成像或目测来进行监测[13-15]；对于表达β-半乳糖苷酶[16]和β-葡萄糖醛酸酶的重组痘病毒，借助其能将底物转化为有颜色的物质或表达荧光蛋白的特性，可通过目测或借助仪器将目的蚀斑筛选出来[17]。对于携带了TK表型的重组痘病毒，通常利用酶酚酸和新霉素等药物来进行筛选[18]。以下将目前常用的重组痘病毒的筛选纯化方法作一综述。