《表1 引物及序列：A型肉毒毒素重链在大肠杆菌中的厌氧表达》

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《A型肉毒毒素重链在大肠杆菌中的厌氧表达》

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以携带合成的HN编码序列的载体及pTIG-TrxA-HC为模板、HF-E/R及F/HR-X为引物（表1），分别PCR扩增HN与重链C端（HC）编码序列（PCR扩增条件：95℃预变性5 min；95℃变性30s，40℃退火30 s，72℃延伸1.5 min，30次循环；72℃终延伸10 min）。PCR产物1∶1混合为模板、HF-E/HR-X为引物，重叠延伸PCR连接HN与HC编码序列（PCR扩增条件：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，40℃退火30 s，72℃延伸3 min，30次循环；72℃终延伸10 min）。PCR产物与载体pTIG-TrxA经Eco RⅠ、XhoⅠ双酶切，回收连接后转化大肠杆菌DH5α。