《表1 引物序列：阿米洛利联合盐酸羟考酮注射液对癌痛模型小鼠脊髓CXCL13、脊髓背角c-fos表达的影响》

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《阿米洛利联合盐酸羟考酮注射液对癌痛模型小鼠脊髓CXCL13、脊髓背角c-fos表达的影响》

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取组织标本，用氯仿、Trizol、异丙醇提取总RNA，加入焦炭酸二乙酯水20μl溶解。取2μg总RNA样品，1μl oligo（dT）12-18，加入焦碳酸二乙酯水，直至总体积为15μl，70℃下孵育10 min，冰浴10 min，加入4μl 5×AMV反应缓冲液+1μl dNTPs（10 mmol/L）+1μl Rnasin（40U/μl）+1μl AMV(200 U/μl），加焦碳酸二乙酯水，直至总体积为25μl。41℃下反应60 min，95℃下灭活逆转录酶5 min。PCR扩增：CXCL13引物、c-fos引物和内参GAPDH引物均由上海生物工程公司合成。引物序列见表1。扩增条件：94℃下预变性5 min；94℃下变性60 s，54℃下退火60 s，72℃下延长60 s，循环共计45个；72℃下延伸10 min。计算CXCL13、c-fos和GAPDH的比值，并将其作为目的基因的mRNA的相对表达量。