《表2 PCR反应体系：灵芝连作土壤真菌群落分析》

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《灵芝连作土壤真菌群落分析》

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按照OMEGA土壤DNA提取试剂盒（D5625-02）说明书，对种植1年、2年、4年灵芝覆土和灵芝博览园邻近的野生土壤DNA进行提取，DNA提取质量通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，并采用紫外分光光度计对DNA进行定量（丛娟等2007）。以ITS1为目标区域进行引物设计，使用的引物为ITS1FI2 5?-GAACCWGCGGARGGATCA-3?和ITS2 5?-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3?（Schmidt et al.2013）。通过PCR对目标片段进行扩增，回收采用Axy Prep PCR Cleanup Kit试剂盒。对纯化后的PCR产物采用Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit试剂盒在Qbit荧光定量系统上对相应的文库进行定量。将浓度为2nmol/L以上的各上机测序文库进行梯度稀释后按比例加以混合，经NaOH变性后可进行上机测序；使用MiSeq Reagent Kit试剂盒于MiSeq测序仪进行2×300bp的双端测序（表2、表3）。