《表1 不同时间PDA培养基内病原菌菌落直径平均值和抑制率》

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《评价芽孢杆菌脂肽产量及底物碳利用效率的新方法》

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说明：括号中为抑菌率（%）

通过WK1对病源菌的抑制效果试验，间接确定WK1产脂肽类物质最高产量的发酵时间为72 h。对解淀粉芽孢杆菌WK1与病原菌的平板对峙培养发现，代谢产物通过破坏菌丝和孢子细胞壁、细胞膜，使细胞原生质泄露，菌丝和孢子萎缩的方式抑制山核桃干腐病原菌Bacillus dothidea的生长[11]。因此，将除菌后发酵液直接混入培养基可间接衡量代谢物的产量，通过发酵液对病原菌的抑制效果试验可确定最高产量的发酵时间。观察含有发酵液（48，60，72 h）培养基上病原菌的生长情况（图1和表1）发现：发酵液对病原菌生长均有抑制作用，随着培养时间的增加抑制率逐渐增加，1～5 d内抑制率增速快，抑制效果显著，5～10 d内增速变缓，甚至48与60 h共2个处理在第10天出现下降。这是因为开始接种的是单菌落病原菌，1 d时间内繁殖的数量有限，但随着时间的延长病原菌数量不断增加，而代谢产物的脂肽浓度有限，所以病原菌数量增加后抑制效果减弱。综合1～10 d的结果，WK1的发酵时间越长抑制效果越好，在72 h抑制率达到最高值，效果最为显著，培养5和10 d时的抑制率达到83.3%和84.9%，对于抗生素筛选的效果而言，已经达到较强的水平。在解淀粉芽孢杆菌HAB-7的抑菌试验中，经优化后最佳培养条件对芒果炭疽菌的抑制率达到78.3%[14]。大量研究表明[15-17]：解淀粉芽孢杆菌的最优发酵时间都在72 h以内，且在本实验中60 h的抑制率已经达80%，继续增加发酵时间对抑制率的提升不大，且会增加发酵成本。