《表1 引物序列：金钱鱼鳃细胞系的建立及其生长特性的初步研究》

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《金钱鱼鳃细胞系的建立及其生长特性的初步研究》

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普通PCR扩增金钱鱼鳃细胞和鳃组织18S rRNA基因。转录组数据库中获取18S rRNA基因序列。利用Premier 5.0设计引物，由生工生物工程（上海）合成。引物序列见表1。扩增体系（50μL）:（NH4）2SO4 Buffer 5μL，Mg2+5μL，dNTP（10mmol·L–1）2μL，cDNA 2μL，引物（10pmol）各1μL，Taq酶0.6μL，ddH2O 33.4μL。反应程序:95℃预变性2min，94℃变性35s，55℃退火40s，35个循环，72℃延伸1min，72℃后延伸10min，4℃保存。利用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，通过胶回收试剂盒回收目的片段，连接至pGEM-T Easy载体，并转化到DH5α感受态细胞中，挑选单克隆菌落送测（生工生物，上海），利用NCBI BLAST（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）对测序结果进行同源性比对分析，确定细胞系来源。