《表1 椎间盘HE染色评分标准[7]》

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《Th17/Treg细胞相关因子IL-17及TGF-β在兔腰椎间盘退变髓核中的变化》

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（1）椎间盘解剖大体观:第4、8周两组分别处死10只动物，横向切开L3～4椎间盘，观察记录椎间盘外观，用无菌手术器械取出髓核组织备用行ELISA检测。（2）HE染色:第4、8周取出处死动物的L4～5椎间盘组织，生理盐水洗净血渍，置于10%福尔马林中固定24 h。将标本从固定液中取出，生理盐水冲洗，常规经不同浓度乙醇梯度脱水，用二甲苯中浸泡替换出标本中的乙醇后，将组织块包埋，固定在切片机上，切成5μm的石蜡切片。取出切片，于80℃烤箱烤片30 min后二甲苯脱蜡，各级乙醇水化，常规脱水，透明，封片。光镜下观察髓核组织形态学及细胞数量的变化，观察各组炎性细胞浸润、纤维组织增生、新生血管形成病理学变化，根据文献[7]进行评分，见表1。（3）ELISA检测两组椎间盘组织中IL-17及TGF-β的含量:将第4、8周留取的L3～4髓核组织用冰冷的生理盐水漂洗，擦干后剔除附属的结缔组织。每个标本各取髓核组织250 mg加入PBS，使用电动匀浆机15 000 r/min研磨制成10%组织匀浆。将制备好的10%匀浆用离心机4℃、3 000 r/min离心15 min，留上清液，弃沉淀。使用抗兔IL-17及TGF-β的ELISA试剂盒，按说明书步骤进行检测。最后通过标准品的OD值和浓度画出标准曲线，根据样品OD值在该曲线上对应的数值计算出相应血清中IL-17及TGF-β的含量。