《表1 ISSR标记的引物》

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《射干内生真菌Fusarium proliferatum的ISSR和SRAP位点遗传多样性分析》

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利用Nagaoka等[17]的52条ISSR引物序列（表1）及采用Li等[18]发表的SRAP引物，并以此为基础来改变引物3’端的3个选择性碱基进行随机组合，共组成的90对引物序列组合（表2）送至上海生物工程公司合成。PCR扩增总体系为10μL:5μL2×TaqPCR MasterMix，2.5μL ddH2O，1μL（10ng/μL）ISSR/SRAP引物，1.5μL DNA。PCR反应程序为：94℃预变性3 min，共40个循环：94℃变性30 s，50～60℃退火30 s（退火温度按照具体引物而定），72℃延伸2 min，最后72℃延伸10min，12℃保存。ISSR-PCR扩增的产物使用2%的琼脂糖凝胶进行电泳检测。SRAP-PCR反应程序为预变性94℃，5 min；接着进入第1个循环：变性94℃，1 min，退火35℃，1 min，延伸72℃，1min，共4个循环；进行第2循环：变性94℃，1 min，退火54℃，1 min，延伸72℃，1 min，共35个循环；最后72℃继续延伸10 min，12℃保存。SRAP-PCR扩增的产物使用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。