《表1 所用的引物:设施内不同土壤管理模式对地温、土壤特性及春季葡萄生长发育的影响》

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《设施内不同土壤管理模式对地温、土壤特性及春季葡萄生长发育的影响》


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于处理后的45 d解析取样,准确称取100 mg葡萄根系和芽分别放在预冷后的研钵中,加入过量液氮进行研磨,研磨至样品呈现滑腻感为止,采用康为世纪科技有限公司的全能型植物RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取葡萄根系和芽中的RNA。以提取的总RNA为模板,利用Clontech SMARTTM Library反转录试剂盒合成cDNA第1链。以表1中Actin为内参基因。用Ultra SYBR Mixture(with ROX)试剂盒(康为世纪)进行实时荧光定量PCR分析。荧光定量PCR使用的仪器为BIO-RADIQ5,所有PCR反应都设3次生物学重复。PCR反应体系为:2×UltraSYBR Mixture 10.0μL,上游引物(10μmol·L-1)1.0μL,下游引物(10μmol·L-1)1.0μL,cDNA 1.0μL。加去离子水至20μL。PCR反应程序为:94℃预变性10 min,94℃变性15 s,56℃退火15 s,65℃延伸10 s,40个循环;每次循环第2步进行荧光采集。最后采用2-ΔΔCT法进行定量数据分析。