《表1 样品信息:河南发现刘氏石龙子及该物种系统位置分析》

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《河南发现刘氏石龙子及该物种系统位置分析》


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PCR扩增线粒体DNA条形码COI基因片段,所用引物为Rep COI-F和Rep COI-R(Nagy et al.2012)。PCR反应Mix采用成都擎科梓熙生物技术有限公司TSINGKE Master Mix(blue)。PCR反应体系为20μl:2×TSINGKE Master Mix(blue)10μl,ddH2O 8μl,引物各0.5μl,DNA模板1μl。PCR反应条件,94℃预变性3 min;94℃变性40 s,48.5℃退火30 s,72℃延伸60 s,35个循环;循环结束后72℃终末延伸8 min。扩增产物纯化后交由生工生物(上海)有限公司在ABI3730测序仪上测序。采用双向测序,测序引物同扩增引物。所得序列上传到GenBank(序列号见表1)。