《流式细胞术的原理和应用》求取 ⇩

第1章 流式细胞术的发展简史1

第2章仪器原理7

2.1．概述7

2.2．流式细胞计的工作原理8

2.3．散射光的测量10

2.3.1．前向角散射11

2.3.2．侧向散射13

2.4荧光测量16

2.4.1．光源17

2.4.2．滤片19

2.4.3．检测器——光电倍增管和硅光电二极管20

2.4.4．光谱重叠的校正23

2.4.5．自发荧光23

2.4.6．荧光的线性测量和对数测量24

2.4.7．细胞群体的DNA直方图和变异系数25

2.5．液流系统29

2.5.1．稳流和雷诺数30

2.5.2．喷嘴31

2.5.3．流动室33

2.5.4．Coulter效应35

2.6.1．小水滴的形成36

2.6细胞分选器36

2.6.2．水滴的充电与偏转38

2.6.3．决定逻辑39

2.7．缝扫描39

2.8．流式细胞计的技术指标41

2.9．标准样品44

2.9.1．标准样品的性质46

2.9.2．非生物学标准样品荧光微球46

2.9.3．生物学标准样品47

3.1．DNA、RNA含量52

第3章细胞的参量和荧光探针52

3.1.1．PI和EB54

3.1.2．MI和CA？和Olivomycin56

3.1.3．HO33342、HO33258和DAPI56

3.1.4．7-AAD58

3.1.5．AO和PY58

3.2．DNA碱基组成61

3.3．染色质结构62

3.4．总蛋白含量63

3.5．抗体和其他分子的共价标记64

3.6．细胞的活性69

3.7．DNA合成70

3.8．细胞膜电位70

3.9．细胞内pH75

3.10．细胞内的钙78

3.11．细胞膜的流动性或微粘度84

3.12．流式细胞术荧光探针的发展前景85

第4章流式细胞术的样品制备88

4.1．单层培养细胞分散为单个细胞88

4.2．实体组织分散为单个细胞89

4.2.1．实体组织分散为单个细胞的原则89

4.2.2．实体组织分散为单个细胞的方法91

4.2.3．实体组织分散为单个细胞的实例95

4.3．流式细胞术进行DNA分析时样品的长期保存方法97

4.4．实体瘤细胞脱核制备98

4.4.1．一步快速核分离和染色程序98

4.4.2．多步核分离和染色程序100

4.5．石蜡包埋组织的流式细胞样品制备102

4.5.1．石蜡包埋组织的流式细胞样品制备103

4.5.2．从石蜡包埋组织分离细胞核的另一个方法103

4.5.3．石蜡包埋组织脱核的参考标准——切片厚度和荧光染色104

4.6．染色体悬浮液的制备105

4.5.4．对石蜡包埋组织脱核的分析105

第5章数据的获取与分析108

5.1．数据的显示109

5.1.1．单参数直方图109

5.1.2．二维点图110

5.1.3．二维等高图111

5.1.4．假三维图112

5.1.5．多维数据的显示113

5.2．数据分析115

5.2.1．非参数分析115

5.2.2．DNA直方图的比较分析116

5.3．DNA直方图的定量分析118

5.3.1．矩形作图法119

5.3.2．峰反射作图法120

5.3.3．作图法的误差121

5.4．DNA直方图的参数分析123

5.4.1．二阶多项式拟合法124

5.4.2．多正态拟合法127

5.4.3DNA直方图参数拟合分析的误差129

5.5．细胞周期各时相的时间130

5.6．双参数图分析131

5.7．多参数数据分析133

第6章流式细胞术在细胞生物学中的应用140

6.1．细胞群体的各周期时相百分比140

6.2．DNA合成速率142

6.3．细胞周期参数的测定145

6.4．用溴脱氧脲嘧啶核苷单克隆抗体研究细胞周期147

6.5．用多参数流式细胞术研究细胞周期151

6.5.1．多参数流式细胞术151

6.5.2．DNA含量及细胞大小152

6.5.3．DNA含量和RNA含量双参数相关测量154

6.5.4．由双参数图分析细胞周期各亚时相156

6.6．药物对细胞周期的影响159

6.7．流式细胞核型分析162

6.8．在分子遗传学领域中的应用165

6.9．精子和雄性生殖细胞的研究166

6.9.1．DNA含量的高分辨率测量及分选167

6.9.2．用于精细胞的研究168

6.10．在微生物学中的应用171

6.10.1．仪器、方法与技术关键171

6.10.2．细菌的细胞周期173

6.10.3．病毒与细胞的相互作用174

6.11．测量细胞突变作用175

6.11.1．对致突作用的测定175

6.11.2．对体外细胞突变的测定175

6.11.3．基因扩增176

6.11.4．致丝裂性的测定176

6.11.5．次黄嘌呤鸟嘌呤核糖基转移酶（HGPRT）176

6.11.7．血型蛋白A变异株177

6.12．流式细胞术在植物细胞中的应用177

6.11.6．血色蛋白变异株177

6.13．细胞内游离钙的流式测定185

第7章流式细胞术在免疫学中的应用187

7.1．流式细胞术应用于免疫研究中的技术问题187

7.1.1．流式细胞术在免疫研究中的多功能特点187

7.1.2．荧光滤片189

7.1.3．免疫技术用荧光染料190

7.1.4．阳性细胞群体标准及荧光强度的判定193

7.1.5．免疫荧光标本的制备195

7.1.6．免疫荧光标本的特殊处理技术196

7.2．流式细胞术在免疫生物学和免疫技术研究上的应用199

7.2.1．细胞表面标记及抗原决定簇性质的研究199

7.1.7．设备消毒199

7.2.2．细胞抗原表达的研究201

7.2.3．免疫和肿瘤细胞测定及分选中的应用203

7.2.4．克隆细胞及杂交瘤的选择和鉴定204

7.3．FCM在免疫功能测定中的应用205

7.3.1．细胞介导细胞毒试验205

7.3.2．吞噬功能实验206

7.3.3．循环免疫复合物的测定207

7.3.4．其他免疫指标的检查207

8.1.1．酶学方法210

第8章流式细胞术在肿瘤学中的应用210

8.1．实体肿瘤组织单细胞悬液样品制备方法210

8.1.2．化学方法212

8.1.3．机械性方法213

8.2．实体肿瘤组织单细胞核（裸核）悬液样品的制备214

8.3．石蜡包埋肿瘤组织单细胞样品制备215

8.3.1．石蜡包埋组织单细胞分散的方法和步骤216

8.3.2．石蜡包埋组织单细胞样品制备方法存在的问题218

8.4．流式细胞术在肿瘤学中的应用220

8.4.1．流式细胞术在检测癌前病变和协助肿瘤早期诊断中的应用220

8.4.2．流式细胞术在肿瘤细胞学诊断中的应用223

8.4.3．流式肿瘤DNA异倍体225

8.4.4．流式DNA异倍体对交界性肿瘤诊断的意义226

8.4.5．流式DNA倍体分析在恶性肿瘤预后估价中的作用226

8.4.6．流式细胞术评价肿瘤化疗疗效的作用228

第9章流式细胞术在血液学中的应用232

9.1．DNA倍体分析232

9.2．细胞增殖周期分析234

9.2.1．细胞周期分析的方法234

9.2.2．细胞周期分析的意义235

9.3．血细胞免疫学研究239

9.3.1．正常血细胞分化成熟的研究240

9.3.2．在急性白血病免疫分型中的应用246

9.4．残存白血病的研究248

9.5．血小板病的研究251

9.6．FCM在分子生物学研究中的应用252

9.7．几种染色方法254

9.7.1．蛋白质-DNA染色法254

9.7.2．吖啶橙（AO）染色法255

9.7.3．免疫抗体标记与DNA双染色法255

9.7.4．DNA与ras基因蛋白检测法255

9.7.5．PCNA与DNA双染色法256