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第一章 骨及软骨的正常组织学1

第一节 软骨组织1

一、透明软骨1

二、弹性软骨2

三、纤维软骨2

四、软骨的组织发生2

五、软骨的退变4

六、软骨的再生和移植4

第二节 骨4

一、骨组织5

二、骨细胞5

三、骨细胞间质6

四、骨的组织结构7

五、扁骨的组织结构8

六、长骨的组织结构8

七、骨组织的形成10

八、骨组织的重吸收11

九、骨细胞谱系11

十、膜内成骨12

十一、软骨内成骨12

十二、骨是人体内的钙库15

第三节 关节16

第二章 骨科组织病理实验室基本设备及常用药品17

第一节 仪器设备17

一、切片机17

二、自动脱水机17

三、自动磨刀机17

四、恒温箱和干燥箱18

五、捞烤片机18

六、冰箱18

七、酸度计18

八、天平19

九、显微镜19

十、显微照相机19

十一、放大机19

十二、一般手术器械19

十三、电扇、电吹风、排气扇19

十四、电炉19

十五、真空泵19

第二节 木器设备20

一、切片柜20

二、切片晾片柜20

三、蜡块柜20

四、药品柜20

五、器械柜20

六、工作台20

七、标本陈列柜20

第三节 切片、染色、配药用具21

一、切片用具21

二、染色用具21

三、配药用具21

四、常用药品21

第四节 骨组织病理实验室的布置与要求21

一、标本说明22

二、各室布置介绍22

第三章 骨组织的固定、脱水、透明、浸渍、包埋技术26

第一节 骨组织的固定技术26

一、骨组织的固定26

二、常用固定剂26

1.10%甲醛水溶液26

2.80%乙醇27

3.MuIler氏液27

4.Zenker-甲醛固定液27

5.Helly氏固定液27

第二节 骨组织的脱水技术28

一、骨组织的脱水28

二、脱水方法28

1.脱钙后骨组织的脱水28

2.先固定后脱钙的骨组织脱水28

3.先脱钙后固定的骨组织脱水29

第三节 骨组织的透明技术29

一、骨组织的透明29

二、常用透明剂30

1.二甲苯30

2.甲苯30

3.苯30

4.香柏油30

5.氯仿31

6.苯甲酸甲酯31

7.冬青油-苯甲酸甲酯31

第四节 骨组织的浸渍和包埋技术31

一、石蜡浸渍包埋技术32

1.浸渍方法32

2.包埋方法32

二、火棉胶浸清包埋技术33

三、塑料浸渍包埋技术34

1.GMA浸渍包埋技术34

2.TAAB环氧树脂浸渍包埋法35

第四章 骨组织切片技术36

第一节 切片刀36

一、切片刀的种类和用途37

1.平凹型刀38

2.深平凹型刀38

3.平楔型刀38

4.双凹型刀38

5.D型刀38

二、切片刀的研磨38

1.磨石39

2.磨刀方法(“8”字磨刀法）40

三、切片机42

四、骨组织切片法43

1.骨磨片技术43

2.骨火棉胶包埋大切片技术45

3.不脱钙骨的制片技术45

第五章 骨的组织学染色技术49

第一节 软骨组织的染色技术49

一、透明软骨结构的显示50

1.软骨细胞50

2.软骨基质52

3.汞溴酚蓝法示蛋白质54

4.Von. Kossa氏法示钙质54

二、弹性软骨结构的显示54

1.碱性蓝B法54

2.Verhoeff+V.G法55

3.Triple-staining-Method三联染色法55

三、纤维软骨结构的显示56

1.MCT法57

2.Pollak氏改良法57

3.Luxol坚牢蓝G法58

4.Romeis氏美蓝染色法58

第二节 骨组织的染色技术59

一、未脱钙骨的染色59

1.可溶性钙的显示59

2.不溶性钙质的显示60

二、脱钙骨组织染色技术63

1.苏木素-伊红法(HE法)63

2.改良的V.G法64

3.网织纤维染色法(Gomori法)65

4.Lillie 氏硝酸银沉淀法66

5.Schmorl氏硫紫-磷钨酸法66

6.Schmorl 氏苦味酸-硫紫法67

第六章 骨的病理学染色技术及应用68

第一节 骨的病理学染色技术68

一、糖原色技术68

1.Best氏胭脂红法69

2.Gomori氏银染法(Arzac与Flores改良法）69

3.铬酸-雪夫氏反应(CAS)70

4.过碘酸雪夫氏反应(PAS)71

二、粘液染色技术71

1.异染反应72

2.阿新蓝染色技术73

3.阿新蓝混合染色技术74

三、网织纤维染色技术76

1.Foot氏法76

2.Gordon 及Sweet法77

四、脂类的染色技术78

1.苏丹染色78

2.显示中性和酸性脂类的尼罗蓝法(Cain，1947)79

3.锇酸染色法80

五、结缔组织染色技术及肌肉杂色技术80

1.Lillie氏猩红-苦味酸-苯胺蓝法81

2.Schaffler氏三纤维同显法81

3.PTAH法82

4.Retterer氏法(显示横纹肌)83

5.间苯二酚-碱性品红染色法(Hart氏改良)83

6.弹性纤维-PAS阳性物质染色法84

六、色素的显示技术85

1.含铁血黄素的显示85

2.黑色素的显示方法86

七、浆细胞的染色技术(Unna-Pappenheim甲基绿-派若宁染色法88

八、淀粉物的显示技术89

1.硫代黄素T荧光染色法89

2.Bennhole氏刚果红染色法90

3.Wloman氏甲苯胺蓝法90

4.King氏银浸染法90

九、纤维素的染色技术91

1.MSB法91

2.Gram氏法92

3.PTAH法93

十、结核菌染色技术93

1.Ziehl-Neesen快速染色法93

2.金胺O-若丹明B荧光染色法94

十一、痛风结晶的显示技术94

1.明矾苏木素染色法95

2.六胺银染色法95

十二、髓鞘染色技术96

1.正常髓鞘的Weil氏法96

2.变性髓鞘的Marchi氏法96

第二节 骨病理染色技术在诊断中的应用97

一、染色技术在骨疾患特殊结构和物质显示上的应用97

1.糖原、粘液物质的显示97

2.网织纤维染色的应用99

3.含铁血黄素染色的应用99

4.其它物质的显示101

二、染色技术在骨疾患鉴别诊断中的应用101

1.网织纤维染色的应用102

2.糖原、粘液染色的应用103

3.脂肪染色的应用103

4.其它染色的应用104

第七章 骨组织病理染色切片质量问题的探讨105

第一节 骨组织制片过程中易出现的问题106

第二节 骨组织切片染色过程中易出现的问题108

第三节 骨肿瘤标本冷冻切片易出现的问题109

第八章 骨的细胞学技术110

第一节 骨细胞学制片技术111

一、涂片技术111

二、印片技术111

三、穿刺技术111

第二节 染色技术113

一、Weight氏法113

二、leishman染色法114

三、Giemsa快速染色法115

第三节 常见恶性肿瘤细胞的形态115

一、成骨肉瘤的细胞形态115

二、软骨肉瘤的细胞形态115

三、脊索瘤的细胞形态116

四 、尤文氏肉瘤的细胞形态116

五、骨巨细胞瘤的细胞形态116

1.Ⅰ级骨巨细胞瘤的细胞形态116

2.Ⅱ级骨巨细胞瘤的细胞形态117

3.Ⅲ级骨巨细胞瘤(恶性)的细胞形态117

第四节 骨肿瘤细胞化学和免疫组织化学117

第九章 骨及软骨的酶组织化学技术118

第一节 AKP的显示120

一、Gomori氏法120

二、偶氮偶合法121

第二节 ACP的显示121

一、Gomori氏法121

二、后偶合技术122

第三节 SDH的显示123

第四节 ATP酶的显示124

一、钙激活的ATP酶技术124

二、镁激活的ATP酶技术125

第十章 骨组织的脱钙技术126

第一节 骨的锐钙方法127

一、酸类单纯脱钙技术128

1.甲酸单纯脱钙剂128

2.硝酸单纯脱钙剂128

3.盐酸单纯脱钙剂129

4.三氯乙酸单纯脱钙剂130

5.硫酸单纯脱钙剂130

二、酸类混合脱钙技术130

1.甲酸为主的混合脱钙剂130

2.盐酸为主的混合脱钙剂131

3.硝酸为主的混合脱钙剂133

4.三氯醋酸为主的混合脱钙剂134

5.缓冲混合脱钙剂134

三、螯合剂脱钙技术135

1.柠檬酸钠脱钙剂136

2.乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙剂136

四、离子交换树脂脱钙技术136

五、电解脱钙技术136

1.电解脱钙原理137

2.电解脱钙液137

六、脱钙机脱钙技术137

1.脱钙机原理138

2.脱钙机的优点138

第二节 骨脱钙其它技术问题的论述138

一、脱钙方法的选择应用138

1.脱钙方法的选择标准138

2.脱钙方法的选择原则139

3.优选脱钙法139

二、骨脱钙技术程序140

1.组织选择140

2.固定140

3.脱钙140

4.酸的中和141

5.水洗141

三、脱钙“终点”的测定141

1.物理检测法141

2.X线照相技术141

3.化学检测法141

四、脱钙后处理142

1.碱处理142

2.酒精处理142

3.水洗处理142

五、骨组织脱钙应注意的问题143

第十一章 骨穿刺标本的脱钙制片技术144

一、目前现状及原因144

二、具体操作方法145

第十二章 骨组织的电子显微镜技术146

第一节 电镜制片技术147

一、固定147

二、脱钙148

三、脱水148

四、包埋149

五、切片149

六、铜网和支持膜149

七、制片程序150

1.取材150

2.前固定150

3.脱钙150

4.后固定151

5.脱水151

6.包埋151

7.切片152

8.染色152

9.观察153

第二节 骨的电镜酶组织化学技术153

一、酸性磷酸酶技术154

二、碱性磷酸酶技术155

1.钙捕捉离子的用法156

2.胞苷-磷酸作底物的用法156

3.柠檬酸盐作螯合剂的用法157

第三节 电镜在骨肿瘤诊断和研究中的作用158

一、电镜在认识骨肿瘤成分性质中的作用158

二、电镜在探讨骨肿瘤组织来源的中的作用158

三、电镜对判断骨肿瘤良恶性的作用159

四、电镜对探讨某些基础理论的作用160

1.瘤细胞胞浆内空泡160

2.瘤细胞内胶原形成160

3.瘤细胞内纤毛形成160

第四节 几种常见骨肿瘤的电镜观察结果160

一、骨肉瘤160

1.多核巨细胞161

2.暗细胞161

二、骨巨细胞瘤161

1.多核巨细胞161

2.基质细胞161

三、骨原发性恶性纤维组织细胞瘤162

1.纤维细胞样瘤细胞162

2.纤维母细胞样瘤细胞162

3.黄色瘤样或组织细胞样瘤细胞162

4.纤维组织细胞163

四、骨的纤维肉瘤163

五、骨髓瘤163

六、骨软骨瘤163

七、软骨母细胞瘤163

八、软骨肉瘤164

第十三章 骨组织免疫组化技术164

第一节 免疫组织化学基本方法164

一、免疫酶标法的六种基本形式165

1.直接法165

2.间接法165

3.间桥法165

4.PAP法165

5.A蛋白-PAP法165

6.ABC法165

二、免疫酶标法的染色步骤165

1.冰冻切片染色法165

2.石蜡切片染色法167

第二节 骨肿瘤免疫组化的联合表达168

一、骨肿瘤的概念及分类169

1.原发性骨肿瘤169

2.继发性骨肿瘤169

二、免疫组织化学技术在骨肿瘤病理诊断中的应用169

1.波形蛋白169

2.细胞角蛋白170

3.结蛋白171

4.S-100蛋白172

5.第八因子相关抗原(FVⅡ RAg)172

6.组织细胞抗原172

7.组织表面分子抗原在骨肿瘤鉴别诊断中的应用172

8.Ⅰ型胶原175

9.CEA(癌胚抗原)175

10.骨肿瘤免疫组化诊断应用总表179

11.骨小细胞性肿瘤的免疫组化鉴别诊断179

第三节 骨免疫组化基本操作和注意事项179

一、基本技术操作179

1.试验计划179

2.抗体稀释度179

3.抗体滴加技术180

4.PBS液洗涤法181

5.孵育技术181

6.蛋白酶消化182

7.显色方法183

二、免疫组化染色结果易出现 的错误情况183

1.切片均为阴性183

2.切片呈弱阳性184

3.切片显示过度背景染色184

4.试验切片呈弱阳性184

5.试验片呈阴性184

6.试验片背景污染185

三、骨组织免疫组化的固定和制片技术185

1.骨组织的固定185

2.骨的脱钙处理185

第十四章 骨的PCR基因扩增技术185

第一节 PCR基因扩增的原理186

第二节 PCR技术的基本设备186

一、PCR扩增仪186

1.最简单的热循环实验方法186

2.采用自动化扩增仪法187

二、微量取样器187

三、移液器188

四、试剂的配制、分装和保存188

第三节 用石蜡切片制备样本的方法188

一、骨组织PCR石蜡包埋标本的制备189

二、二甲苯脱蜡提取法189

三、水浴脱蜡抽提法190

四、直接扩增法191

五、骨PCR扩增技术中应注意的问题191

六、对照实验191

七、实验注意事项192

第十五章 原位杂交技术192

第一节 原位杂交技术的应用原理193

第二节 原位杂交技术在组织病理学上应用的原理193

一、DNA探针193

二、DNA控针检测肿瘤标记物的基本原理194

三、DNA探针原位杂交检测肿瘤标记物方法步骤195

第三节 石蜡切片原位杂交方法步骤195

一、操作步骤195

1.组织片预处理195

2.杂交196

3.洗涤及显色196

第十六章 骨骼标本的陈列技术197

第一节 骨骼标本材料的收集197

第二节 骨骼标本材料的处理198

一、经防腐固定后的骨骼标本处理198

1.加压蒸煮法198

2.碱液浸泡法199

3.药液浸煮法199

4.活性酶洗涤剂加热浸泡法199

二、腐?骨的处理200

三、未经防腐固定处理的标本处理200

1.人工浸蚀法201

2.自然浸蚀法202

第三节 骨骼标本的制作技术203

一、脱脂203

1.四氯化碳脱脂法204

2.有机溶剂浸泡法204

二、漂白204

1.漂白粉和漂白精粉漂白法205

2.过氧化氢漂白法205

3.过氧化钠漂白法205

三、表面处理206

1.石蜡浸渍法206

2.表面涂布法206

四、骨标本的连接207

1.弹簧纽结法207

2.活动片连接法207

3.双方向活动片连接法208

4.钩环连接法208

5.钩扣连接法208

6.车轴连接法208

7.其它连接法209

五、骨骼标本的装配固定209

六、整体骨架的串联210

1.手骨的串联210

2.足骨的串联211

3.上肢骨的串联212

4.下肢骨的串联212

5.躯干骨的串联212

6.颅骨的串联215

七、活动骨标本的串联技术215

1.指(趾 )骨的连接方法215

2.脊柱的连接方法215

3.椎肋的连接方法216

4.活动骨架的连接方法217

八、可移动手骨标本的串联技术218

九、可移动足骨标本的串联技术218

十、带有韧带和关节囊的可移动骨骼标本的串联技术219

第四节 骨标本的加工技术220

一、颅骨的分离220

1.冲击分离法220

2.干豆膨胀分离法220

二、骨的锯切220

1.颅颞骨切面的锯切法221

2.其它骨的锯切法221

第五节 骨透明标本的制作222

一、胚胎骨骼透明标本的制作技术223

1.Schultze法223

2.?透明法223

3.?法223

二、胚胎骨骼染色透明标本的制做技术224

1.茜素红染色法224

2.硫酸铜浸染法225

三、胚胎骨与软骨双重染色透明标本制做技术225

1.茜素红-甲基绿双重染色法225

2.茜素红-甲苯胺蓝双重染色法226

四、骨空腔性内部结构的透明标本制做技术227

1.内耳骨迷路透明标本227

2.内耳膜述路透明标本227

五、骨血管透明标本技术228

第六节 显示骨结构和成分的标本制作技术228

一、骨膜的显示228

1.骨外膜228

2.骨内膜229

二、骨质的显示229

三、骨髓的显示229

四、骨化学成分的显示229

1.有机质的显示229

2.无机质的显示230

第十七章 骨肿瘤标本制作技术230

第一节 骨肿瘤标本的固定方法231

第二节 骨肿瘤标本的剖面技术231

一、检视和构思231

1.步骤232

2.原则232

二、具体操作233

第三节 骨肿瘤标本的放置和固定技术236

一、基本方法和原则236

二、具体操作237

1.选择标本缸237

2.框架制作237

3.吊装固定239

第四节 保存液的配制241

一、常用保存液的配制241

1.10%甲醛液241

2.10%甲醛钙液241

二、自然保色液241

第五节 封缸与标签242

一、封缸胶的配制242

1.玻璃标本缸用胶242

2.有机玻璃标本缸用胶243

三、标签243

二、封缸操作法243

1.玻璃标本缸封存法243

2.有机玻璃标本缸封存法243

第六节 骨骼浸溃标本的制作技术243

第七节 骨肿瘤薄片解剖标本的制作技术244

一、制作方法和处理245

二、显色和染色246

三、薄片标本的H.E染色法246

四、有机玻璃盒的制作247

五、冲水槽的制作247

六、冲水框的制作248

第十八章 照相、冲洗及幻灯片制作技术249

第一节 大体、显微摄影技术249

一、大体标本拍摄技术249

1.要求250

2.原则250

3.照明250

4.照射角的运用251

5.拍摄背景的布置251

6.拍摄方法252

二、显微摄影技术252

1.简易显微照相装置应具备的条件254

2.简易显微照相装置的基本构造254

3.简易显微照相装置的装配原理255

4.简易显微照相装置使用的感光材料256

5.简易显微照相装置的曝光256

6.简易显微照相装置的操作法258

7.简易显微照相装置的理论问题259

三、近距离照相技术262

1.近距离照相的光学知识262

2.近距离照相的曝光校正264

3.照明与胶片266

4.近距离照相的注意事项268

第二节 胶片的冲洗268

一、黑白负片的冲洗268

1.微粒两液显影268

2.菲尼酮强力微粒显影液269

3.D-23显影液269

二、彩色负片的冲洗270

1.冲洗工艺270

2.配方270

第三节 照片的放大技术272

一、黑白照片的制作272

1.相纸272

2.放大准备273

3.放大操作274

二、彩色照片的制作274

1.彩色放大的主要设备275

2.彩色放大的校色技术276

3.彩色照片的放大程序(减色法)276

4.冲洗彩色照片的配方及工艺279

第四节 幻灯片的制作技术281

一、黑白幻灯片的制作281

1.翻拍技术281

2.负正法制作黑白幻灯片282

3.反转法制作黑白幻灯片282

4.蓝底幻灯片的制作284

二、彩色幻灯片的制作286

第十九章 骨组织病理实验性技术289

第一节 95%酒精穿入皮质骨速率的实验技术290

一、实验(一)291

1.材料291

2.方法291

二、实验(二)292

1.材料292

2.方法292

3.结果292

三、统计学意义293

第二节 骨细胞和软骨细胞的组织化学实验技术295

一、实验(一)骨细胞与软骨细胞的SDH显示295

二、实验(二)SDH活性与形态学的关系297

第三节 骨肿瘤病中抗人Ⅰ、Ⅱ型胶原抗体实验技术299

一、材料和方法300

1.Ⅰ型胶原的提取和纯化300

2.Ⅱ型胶原的提取和纯化300

3.三法鉴定301

4.抗人Ⅰ、Ⅱ型胶原抗体的制备及鉴定301

二、抗人Ⅰ、Ⅱ型胶原抗体在骨肿瘤病理研究中的应用302

1.材料和方法302

2.结果302

3.软骨性肿瘤对抗Ⅰ型胶原抗体的免疫荧光反应302

4.软骨性肿瘤对抗Ⅱ型胶原抗体的免疫荧光反应302

三、本实验的意义303

第四节 骨基质诱导异位骨形成实验模型的组织学和组织化学实验技术304

一、材料和方法304

1.动物304

2.骨基质粉的制备304

3.手术操作305

4.组织切片305

二、诱导性骨形成的组织化学定位305

1.碱性磷酸酶(AKP)定位305

2.酸性粘多糖定位306

3.钙质沉着定位306

三、实验结果306

1.诱导性骨形成的间充质细胞增生期306

2.软骨细胞分化期307

3.软骨细胞退变期307

4.骨形成期307

第五节 实验家兔骨折愈合骨组织形态计量学实验技术308

一、材料和方法309

二、骨折模型不脱钙切片的制作311

三、骨计量学测量方法及测定指标313

四、骨组织形态测量学参数315

1.静态组织学参数315

2.动态组织学参数316

五、结果317

六、骨计量测量指标、公式及单位320

第六节 未脱钙骨酶组织化学实验性新技术——家兔桡骨骨折模型低温塑料切片322

一、材料323

二、固定、脱脂、脱水323

三、浸透323

四、包埋323

五、切片323

六、染色324

第七节 免疫组织化学在骨小圆细胞型成骨肉瘤诊断及鉴别诊断中的价值325

一、概要325

二、目的326

三、材料与方法326

四、观察结果327

五、讨论327

第二十章 微波（MW）在骨病理技术中的应用329

一、基本原理330

二、骨组织的MW固定脱钙法330

三、骨组织的MW脱水、透明、浸质法331

四、骨组织的MW特殊染色方法332

五、软骨组织冰冻切片MW处理法332

六、骨组织免疫组化的MW法332

七、电镜MW法335

八、原位杂交MW法335

九、原位PCR MW法336

第二十一章 常用配方及计算方法337

第一节 缓冲液337

一、Ⅰ型缓冲液(弱酸及其盐）337

1.Walpole醋酸-醋酸钠缓冲液337

2.Holnes硼酸-四硼酸钠缓冲液338

二、Ⅱ型缓冲液(强碱-弱酸及其盐)338

1.氢氧化钠-硼砂缓冲液338

2.氢氧化钠-硼酸缓冲液339

3.氢氧化钠-氯化钠-甘氨酸缓冲液340

4.氢氧化钠-醋酸缓冲液340

三、Ⅲ型缓冲液(强酸-弱酸及其盐)341

1.甘氨酸-盐酸缓冲液341

2.柠檬酸钠-盐酸缓冲液341

3.盐酸-氯化钾缓冲液342

四、X型缓冲液(同一种酸的两种盐类)343

1.Sorersen磷酸盐缓冲液343

2.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液343

五、配制缓冲液的注意事项344

六、常用于缓冲液的化学试剂分子量344

第二节 常用酸碱盐溶液的简便配制法345

一、常用酸溶液的配制345

二、常用碱溶液配制法346

三、常用盐溶液配制法347

四、PH值及溶液酸碱度的关系347

第三节 化学计算公式348

1.元素的当量348

2.酸的当量348

3.碱的当量348

4.盐的当量349

5.克当量数349

6.毫克当量数349

7.百分浓度349

8.克分子浓度349

9.当量浓度349

10.毫克当量浓度349

11.溶液的稀释349

12.“十”字交叉法350

13.各种固定剂穿透组织的速率计算公式350

14.常用骨组织染料的溶解度351

第四节 免疫组化常用试剂配制方法351

一、固定液351

1.10%中性缓冲福尔马林351

2.4%多聚甲醛缓冲固定液352

3.苦味酸-多聚甲酸固定液（PAPG）352

4.过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液(PLP)352

5.多聚甲醛戊二醛固定液(PG)352

二、缓冲液353

1.Tris-HCI缓冲液(0.5mlo,ph7.6)353

2.TBS液(0.05mol，ph7.6)353

3.TBS液(0.02mol，pH8.2)353

4.DBS液(0.1mol，ph7.4)353

5.醋酸盐缓冲液(0.1mol，ph5.2)354

三、显色液354

1.DAB-H2O2354

2.AEC354

第五节 原位杂交技术试剂的配制354

一、原液354

二、工作液355

第六节 PCP常用试剂配制357

一、TE缓冲液357

二、STE液357

附录358

骨科手术植骨用骨的制备技术358

第一节 冷冻干燥和低温冷冻法骨库的建立359

一、骨库设备359

1.贮存系统359

2.骨材料加工处理系统360

二、供体和来源的选择363

第二节 骨材料贮存的制作方法364

一、低温冷冻法364

1.取材364

2.处理364

3.贮存364

二、冷冻干燥法364

三、灭菌365

第三节 骨移植366

一、自体骨移植367

二、异体骨移植368

三、异种骨移植369

四、骨移植的生物学和评定方法369

1.骨移植的生物学原理369

2.骨移植后效果的评价370

参考文献372