《农业生物技术的原理与方法》求取 ⇩

第一章　植物分子生物学浅说1

一、核基因组3

二、核基因的表达6

三、转录7

四、RNA的加工9

五、转译11

六、转译后的修饰和包装13

七、发育过程中基因表达的调控15

八、叶绿体的生物合成17

九、线粒体基因组22

十、结论24

一、农杆菌的生物学及致瘤特性25

第二章　高等植物的基因转移载体25

二、冠瘿瘤诱导及DNA转移的分子生物学27

三、转移DNA（T-DNA）区29

四、致病区（Vir）32

五、T-DNA转移的机理34

六、转化初期的分子动向34

七、T-DNA加工36

八、T-DNA与植物DNA连接点序列分析38

九、T-DNA在植物基因组内定位和结构39

十、农杆菌质粒作为转化载体39

十一、非致瘤Ti质粒载体的基本组分39

十三、顺向载体（cis）40

十二、非致瘤植物转化载体40

十四、反向载体（Trans）42

十五、特殊用途的转化载体48

十六、农杆菌Ti质粒载体系统的选用50

十七、顺向型与反向型载体比较50

十八、Vir基因、25bp重复序列和寄主范围51

十九、鉴别转化植物细胞的可选择和可筛选标记基因53

二十、外源基因克隆到植物转化载体53

二十一、农杆菌载体的应用56

第三章　禾谷类作物外源基因的直接导入及表达58

一、聚乙二醇法（PEG）60

二、电穿孔法（electroporation）61

三、注射法（injection）63

四、粒子轰击法（particle bambardment）64

第四章　农杆菌转染在植物分子生物学中的应用67

一、农转染67

二、农转染方法和优点69

三、农转染法的应用潜力72

四、前景77

第五章　植物基因的分子结构及其调控78

一、一级结构上的因子78

二、一级结构的分析80

三、基因的功能组成81

四、利用电脑分析分子结构82

五、CaMV 35S启动子的研究进展83

六、组织特异性基因的调控85

七、种子蛋白基因的调控86

八、其他组织特异性基因的调控88

九、贮藏蛋白基因89

十、光诱导基因91

十一、环境胁迫诱导基因调控96

十二、激素对基因表达的调控100

第六章　细胞分裂素对大分子合成及基因表达的调控102

一、细胞分裂素的活性形式102

二、细胞分裂素对大分子合成的调控103

三、细胞分裂素调控基因表达的复杂性105

四、两种激素调控的基因表达107

五、细胞分裂素促进光调控基因的表达108

六、细胞分裂素结合分子109

七、结论110

第七章　植物基因表达的光调控112

一、光对rRNA基因表达的影响114

二、光对转录丰盛度的影响118

三、白光及光敏色素对核功能的调控121

四、结论143

第八章　叶绿体基因组的遗传操作144

一、由农杆菌诱导的叶绿体转化145

二、叶绿体基因组146

三、外源基因导入质体150

四、外源基因整入叶绿体DNA152

五、质体的自主复制153

六、叶绿体转化的选择性标记156

七、展望157

八、烟草叶绿体基因的表达与调控157

第九章　植物基因的分离工具：转座子171

一、成功的植物转座子标记171

二、玉米转座子在其他植物中的活性173

三、激活剂［Ac］是一种简单的转座子174

四、改建Ac转座子以优化异源植物的转座子标记176

五、转座子插入突变体的鉴定179

第十章　种子蛋白的基因工程182

一、贮藏蛋白的特性183

二、编码贮藏蛋白的cDNA的制备185

一、抗除草剂的植物基因工程227

第十一章　植物基因工程与农作物改良227

二、抗病毒的植物基因工程232

三、抗虫的植物基因工程235

第十二章　限制性片段长度多态性在植物品种改良中的作用238

一、RFLP的概念239

二、RFLP-基因定位的有用工具240

三、作物RFLP及遗传图谱的构建242

四、RFLP的应用243

五、利用RFLP进行QTL定位的基本原理246

第十三章　植物分子生物学操作技术251

一、大肠杆菌和农杆菌的培养和贮存252

二、从大肠杆菌制备大量质粒255

三、适用于连接的DNA酶切片段制备和纯化260

四、DNA片段连接到植物转化载体265

五、重组质粒经转化导入大肠杆菌270

六、少量快速制备大肠杆菌质粒DNA275

七、通过限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳分析微量DNA278

八、重组质粒接合到农杆菌279

九、从根癌农杆菌分离总核酸281

十、限制性酶酶解农杆菌总DNA283

第十四章 用根癌农杆菌的T？质粒和发根农杆菌的Ri质粒转化双子叶植物细胞288

一、概说288

二、使用野生型致瘤的农杆菌和发根农杆菌转化301

三、用非致瘤性Ti质粒载体转化大的异质外植体312

四、直接再生转化植株：烟草叶圆片的转化313

五、经愈伤组织再生转化植株：亚麻苗外植体的转化322

六、小的同质外植体的转化331

七、烟草叶片原生质体的分离332

八、烟草叶肉原生质体的培养337

九、通过与农杆菌共培养转化原生质体339

十、胡萝卜悬浮细胞的转化347

第十五章　外源基因DNA直接转入植物细胞的技术368

一、农杆菌转化系统的局限性368

二、以分离的载体DNA转化植物原生质体369

三、用DNA媒介基因转移法转化原生质体的进展370

四、DNA媒介基因转移载体372

五、DMGT载体的瞬间表达372

六、供稳定转化用的DMGT载体373

七、用DMGT载体转化完整的细胞组织374

八、微注射技术374

九、微注射和微粒载体导入法374

十、聚乙二醇刺激外源DNA摄入原生质体375

十一、PEG刺激DNA摄入到原生质体376

十二、从原生质体里提取DNA进行斑点印迹378

十三、电穿孔法进行原生质体转化384

十四、用于瞬间表达的最适电穿孔法387

十五、微注射法用于植物细胞转化390

十六、微注射法转化植物细胞………………………………… 39？第十六章　植物的核酸分离技术400

一、植物核酸的分离400

二、从干冻植物材料中制备总DNA402

三、从新鲜植物材料中分离DNA410

四、核DNA分离414

五、叶绿体和线粒体DNA的分离418

六、用二苯胺测定核酸粗提液中的DNA浓度422

七、植物总RNA的制备424

八、多聚（腺苷）mRNA的制备429

第十七章　DNA酶切除及Southern杂交分析434

一、DNA的限制性酶解434

二、以琼脂糖凝胶电泳分离DNA437

三、Southern印迹分步分离的DNA限制酶切片段443

四、杂交Southern印迹的DNA448

五、以寡聚核苷酸标记技术制备杂交探针452

一、概说458

第十八章　植物基因组成及其表达分析458

二、以Southern印迹法分析T-DNA的组成464

三、以Northern印迹法分析基因表达476

四、以Cab报告基因证明环境及器官特异性对基因表达的调控482

五、以新霉素磷酸转移酶、Ⅱ（NPT-Ⅱ）为报告蛋白研究过渡肽序列的作用490

六、从烟草植株中分离完整的叶绿体493

七、NPT-Ⅱ的原位检测495

八、NPT-Ⅱ的Western印迹分析504

九、以报告酶编码序列组建融合基因：GUS基因融合系统509

十、检测转化植物组织中的胭脂碱520

第十九章　大肠杆菌、质粒载体及噬菌体531

一、大肠杆菌535

二、质粒载体559

三、噬菌体587

第二十章　RNA的制备与分析630

一、由真核和原核细胞制备RNA630

二、由组织培养细胞制备胞质RNA631

三、由组织培养细胞制备胞质RNA（简要方法）634

四、胍盐方法制备总的RNA637

五、用苯酚／SDS法制备植物RNA642

六、细菌RNA制备646

七、多聚腺苷RNA制备（基本方法）650

八、RNA结构分析和合成653

九、制备单链末端标记探针和mRNA的S1分析（辅助方法）659

十、mRNA定量S1分析的控制663

十一、RNA酶保护分析（基本方法）668

十二、核苷酸酶保护分析671

十三、引物延伸（基本方法）676

十四、通过Northcrn杂交分析RNA680

十五、新转录RNA的鉴定：哺乳动物细胞核脱落转录（基本方法）689

第二十一章　构建重组DNA文库699

一、重组DNA文库的概况699

二、由基因组DNA制备插入DNA705

三、由mRNA制备插入DNA片段719

四、基因组DNA和cDNA文库的构建739

五、转化或包装文库的扩增748

第二十二章　重组DNA文库的筛选754

二、制备噬菌体文库平板并向滤膜转移756

一、制备文库平板并向滤膜转移756

三、制备平板及转移质粒和装配质粒文库761

四、与放射性探针杂交764

五、用人工合成的寡聚核苷酸作探针772

六、噬菌体、装配型质粒和质粒克隆的纯化778

七、纯化质粒及粘粒克隆781

八、抗体筛选782

九、免疫筛选λ噬菌斑中的融合蛋白质783

十、用抗体筛选λgt11表达文库783

十一、抗体筛选前用IPTG诱导融合蛋白表达786

十二、cDNA插入序列在噬菌体λ载体间的转移789

十三、杂交选择及转译的免疫筛选793