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摘要1

ABSTRACT3

英文缩略词表4

一、前言5

二、立题依据6

1中医体质研究6

1.1中医体质学的概述6

1.2 中医体质学的应用7

2NONFH的中医研究7

3痰湿体质与NONFH的联系及意义7

4NONFH痰湿体质与基因多态性的研究及意义8

三、材料与方法9

1病例资料9

2诊断及纳入标准9

2.1西医诊断标准9

2.2 中医诊断标准9

2.3 纳入标准9

2.4 排除标准9

2.5 病例剔除和脱落标准9

3中医体质分类及判定标准10

4研究方法10

4.1调查方法10

4.2 血液标本采集10

4.3 体质判定方法10

5资料处理与分组10

5.1建立病例数据库10

5.2 病例分组11

6实验方法11

7分子生物学试剂与仪器11

7.1主要试剂11

7.2 主要实验仪器11

8统计12

9技术路线图13

四、分子生物学实验研究14

1血液基因组DNA提取14

1.1血液基因组DNA提取试剂盒组成14

1.2 DNA提取操作步骤14

1.3 DNA提取物检测15

1.4 DNA所得率及纯度测定15

1.5 DNA储存15

2NONFH目标基因SNP位点选择15

3SREBPS基因位点相应序列引物设计及合成16

3.1引物设计与合成16

3.2 引物的配置16

3.3 引物验证16

4目的基因序列的PCR扩增16

4.1PCR反应体系16

4.2 PCR反应条件17

4.3 PCR扩增产物验证17

5琼脂糖水平平板凝胶电泳实验17

5.1胶液的制备17

5.2 胶板的制备17

5.3 电泳缓冲液17

5.4 加样17

5.5 电泳18

5.6 观察和拍照18

6PCR扩增产物纯化19

6.1PCR反应液纯化DNA片段的试剂盒组成19

6.2 操作步骤19

7PCR纯化产物测序分析19

7.1测序引物的设计19

7.2 PCR纯化产物测序19

五、结果20

1临床资料结果20

1.1性别与NONFH相关性分析20

1.2 NONFH实验室检查分析结果20

2分子生物学实验研究结果21

2.1基因组DNA提取结果21

2.2 SREBP-2、SREBP-1C基因位点相应序列的PCR扩增结果21

2.3基因测序结果22

2.3.1 SREBP-2基因SNP位点测序结果22

2.3.2 SREBP-1C基因SNP位点测序结果23

2.4SREBPS基因SNP位点实验结果统计分析24

2.4.1 SREBP-2基因RS2267439 SNP位点实验结果24

2.4.2 SREBP-1C基因RS2297508 SNP位点实验结果29

六、讨论32

1脂类代谢紊乱学说与NONFH发生机制32

2中医体质与NONFH的联系及意义32

3NONFH及中医体质与SREBPS基因多态性的相关性33

3.1NONFH及中医体质与SREBP-2基因多态性的相关性33

3.1.1 NONFH与SNP位点基因型的相关性34

3.1.2 NONFH与SNP位点等位基因的相关性34

3.1.3 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点基因型的相关性34

3.1.4 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点等位基因的相关性34

3.1.5 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组基因型的相关性34

3.1.6 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组等位基因的相关性35

3.2NONFH与SREBP-1C基因RS2297508位点基因多态性的相关性35

3.2.1 NONFH与SNP位点基因型的相关性35

3.2.2 NONFH与SNP位点等位基因的相关性36

3.2.3 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点基因型的相关性36

3.2.4 NONFH平和质与痰湿质的SNP位点等位基因的相关性36

3.2.5 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组基因型的相关性36

3.2.6 NONFH平和质及痰湿质与健康对照组等位基因的相关性36

3.3 NONFH与SREBP-1C基因RS13306739 SNP位点基因型的相关性36

七、结语38

参考文献39

综述41

甾醇调节因子结合蛋白基因多态性与股骨头缺血性坏死相关性研究进展41

八、致谢49

附录50

附录1伦理审查表50

附录2病例调查材料证明51

附录3兰州军区总医院实验场地证明52

附录4SREBPS基因库查询SNP序列53

附录5非创伤性股骨头坏死中医体质类型及相关基因多态性研究病例调查表54

附录6实验、临床瞬间生活集锦82

附录7在校期间学习情况85