《表1 荧光定量PCR所用引物》
选用Takara PrimeScriptTM RT regent Kit with gDNA Eraser对海萝RNA进行反转录实验,合成cDNA模板。以10×cDNA稀释液为模板,进行荧光定量PCR(qRT-PCR)扩增。qRT-PCR反应操作流程参照SYBR?Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus,Takara)说明书进行。20μL反应体系包括:2μL稀释后cDNA模板,正向反向引物各0.8μL,10μL SYBR?Premix Ex TaqTM(2×),6.4μL ddH2O。使用三步法进行扩增,扩增程序为:95℃30 s变性;95℃5 s,55℃10 s,72℃20 s,共40个循环。循环结束后通过95℃15 s,60℃30 s,95℃15 s绘制溶解曲线。qRT-PCR扩增反应在Takara TP800 Cycler Dice上进行。每个反应设置3次技术重复,使用2–ΔΔCt法计算目的基因相对表达量,应用Excel处理数据并绘图。所用引物见表1。
图表编号 | XD0089703900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.05.15 |
作者 | 刘顺、胡自民、张全胜、段德麟 |
绘制单位 | 中国科学院海洋研究所海洋大科学研究中心实验海洋生物学重点实验室、青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室、中国科学院大学、中国科学院海洋研究所海洋大科学研究中心实验海洋生物学重点实验室、青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室、烟台大学海洋学院、中国科学院海洋研究所海洋大科学研究中心实验海洋生物学重点实验室、青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 |
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