《表1 引物序列:DNA甲基转移酶在维吾尔族人群网膜脂肪中的表达及其与脂肪因子的相关性分析》

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《DNA甲基转移酶在维吾尔族人群网膜脂肪中的表达及其与脂肪因子的相关性分析》


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各组手术前1 d测量WC、臀围(HC),计算BMI、WHR。全自动生化分析仪检测FPG (GOD法)。手术开腹后取网膜脂肪组织,约3 cm×3 cm,液氮冻存。取RNA组织保存试剂固定的脂肪组织300 mg,使用含有RNA酶抑制剂的trizol裂解液在维持RNA完整性的情况下,使样品匀浆化并促进细胞裂解;使用氯仿离心分离含有RNA的水相;再加入异丙醇离心后取沉淀回收RNA[3],RT-PCR检测mRNA表达水平。RT-PCR仪购自美国ABI公司,型号ABI7500 Fast。PCR反应体系为20μl:RNase-free水7μl,上游引物0.5μl,下游引物0.5μl,SYBR Select Master Mix 10μl,c DNA 2μl。反应条件为:经94℃、30 s预变性后,95℃变性5 s,60℃、34 s,共40个循环。扩增引物序列及目的片段长度(表1)。表达量以目的基因与内参GAPDH比值表示,内参GAPDH拷贝数为1。