《表1 所用引物序列:青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析》
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《青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析》
注:下划线表示酶切位点Note:Restriction sites are underlined
设计特异性引物PwNAC30-pBI121-F和PwNAC30-pBI121-R(表1),以构建的PwNAC30启动子pEASY-T1载体为模板,经过PCR、酶切、连接等步骤,将PwNAC30的启动子克隆到pBI121载体上(切除pBI121自身的CaMV35S启动子序列),构建重组表达载体PwNAC30-QDZ-pBI121。通过转化,将重组载体PwNAC30-QDZ-pBI121和pBI121空载体转入农杆菌GV3101中,通过菌落PCR鉴定阳性菌落。挑单独的阳性菌落于1.5mL YEB培养基中(50μg·mL-1卡那霉素+20μg·mL-1利福平),28℃、180r/min摇床中过夜培养,至OD600为1.0,吸取1mL菌液至离心管,3 000r/min离心5min集菌,用1 mL本生烟草注射缓冲液(10mmol·L-1 MES,10mmol·L-1氯化镁,100μmol·L-1乙酰丁香酮,pH为5.7)将菌重悬,3 000r/min离心5min,弃上清,重复3次,至OD600=0.6。
图表编号 | XD0030226400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.01.01 |
作者 | 梁珂豪、孙永江、袁义杭、张凌云 |
绘制单位 | 北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室、北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室、北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室、北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室 |
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