《表1 各引物序列信息:microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性》
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《microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性》
1)组织中RNA提取:由液氮中取出大鼠部分肺组织切片,进行充分研磨后,于EP管中将含有1 ml Trizol裂解液加入,充分摇匀;室温5 min静置,将氯仿加入200μl,之后混匀充分,10 min室温放置;而后4℃,12 000 r/min离心15 min。于RNasefree离心管(1.5 ml)内取上层水相,放置于冰上30 min前需添加等体积异丙醇后混匀震荡。取出离心管,然后再次于4℃,12 000 r/min离心15 min,得到RNA沉淀。将RNA沉淀采用75%的酒精500μl洗涤2次后,室温下自然风干沉淀;RNA采用RNase-free水50μl室温溶解,置于-80℃冰箱备用,应用NanoDrop对RNA行浓度和纯度检测。2)定量检测PCR:根据ABI公司的试剂盒TaqMan?RNA Reverse Transcription kit说明书操作,通过体外反转录实验抽提的RNA,得到产物cDNA;反应条件:16℃孵育30 min,42℃30 min孵育,85℃孵育5 min,保存4℃。采用反应体系TaqMan?Universal PCR Master Mix 20μl,将得到的cDNA为模板,进行PCR荧光定量,检测内参参照β-actin,操作采用罗氏LightCycler480仪器进行。?CT=|CTU6-CTmicroRNA-1285-3p|,其中?CT表示microRNA-1285-3p的相对表达,反应条件为:95℃,10 min预变性;70℃30 s,95℃15 s,55℃30 s,进行循环扩增40个,采用同样的方法对TNF-α以及IL-6的表达进检测。引物信息见表1。
图表编号 | XD00166860200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.08.01 |
作者 | 张海云、韩伟东、刘海梅、毛凯 |
绘制单位 | 南通市第六人民医院检验科、南通市第六人民医院检验科、南通市第六人民医院检验科、宝鸡市中心医院输血科 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |