《表2 24cm IPG预制胶条 (pH 4—7) 等电聚焦程序》

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《米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质组及其对温度变化的响应研究》

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使用2-D DIGE方法对标记的细胞表面膜蛋白进行分离，双向电泳的等点聚焦条件如表2所示。蛋白样品溶液分别加入1%DTT和0.5%IPG buffer，用重溶液（RB）补齐至450μL，混匀后15000g离心20min取上清液。使用pH 4—7的IPG胶条，按照表2设置的等电聚焦程序进行蛋白质一向分离。等电聚焦结束之后立即将胶条在平衡液Ⅰ（6mol/L urea，50mmol/L Tris，pH 8.8，30%V/V glycerol，2%SDS，a trace of bromophenol blue，1%DTT）和平衡液Ⅱ（6mol/L urea50mmol/L Tris，pH 8.8，30%V/V glycerol，2%SDS，a trace of bromophenol blue，2.5%碘乙酰胺）各平衡17min，之后进行第二向SDS-PAGE电泳，分离胶浓度12%，浓缩胶浓度5%。