《表1 18 cm IPG胶条IEF程序设定》

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《泛素蛋白连接酶E3A在乳腺癌细胞中作用的蛋白质组学与生物信息学分析》

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第一向等点聚焦IEF:室温平衡18cm IPG预制干胶条至少15min；取蛋白质样品340μL（约2.0mg）进行上样；将IPG干胶条胶面朝下置于水化盘中蛋白样品溶液上；缓慢加入2mL矿物油覆盖IPG干胶条；按表1步设置等电聚焦程序进行IEF等点聚焦；结束后去除矿物油，取出胶条，加适当体积的SDS-DTT平衡缓冲液进行摇动平衡15min；取出后再加入适当体积的SDS-碘乙酰胺平衡缓冲液再次摇动平衡15min。第二向SDS-PAGE电泳:配制12%的丙烯酰胺凝胶后常规灌胶；取平衡后的胶条，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触，凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液，放置5min使其凝固；在电泳槽加入电泳缓冲液后，起始时用的低电电压，观察溴酚蓝指示剂，待指示剂在完全走出IPG胶条后，并浓缩成一条线后，再加大电压，待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时，停止电泳。