《表1 等电聚焦程序设置：毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)总蛋白质双向电泳体系的建立》

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《毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)总蛋白质双向电泳体系的建立》

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根据GE Helthcare Ettan IPGphor3等电聚焦系统指南进行操作。取适量蛋白质样品，加入水化缓冲液（7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，2%CHAPS，0.5%IPG缓冲液，0.002%溴酚蓝）至450μL，振荡混匀后12 000 g，4℃离心10 min，保留上清液。将上清液加入到24 cm标准胶条槽中，将24 cm的IPG胶条胶面朝下覆盖在样品上，去除气泡，加入2 mL覆盖油覆盖胶条，随后进行程序设置。Ettan IPGphor3系统温度设为20℃，电流为50μA，根据程序1对24 cm、pH值为3～10的IPG胶条进行等电聚焦；根据程序2对24 cm、pH值为4～7的IPG胶条进行等电聚焦（表1）。等电聚焦结束后胶条分别在平衡缓冲液Ⅰ（6 mol/L尿素，75 mmol/L Tris-HCl(pH=8.8），29.3%甘油，2%SDS，0.002%溴酚蓝，2%DTT)和平衡缓冲液Ⅱ（6mol/L尿素，75 mmol/LTris-HCl(pH=8.8），29.3%甘油，2%SDS，0.002%溴酚蓝，2.5%碘乙酰胺)中进行平衡，每次平衡15 min。平衡结束后进行第二向SDS-PAGE电泳。