《表1 实时定量RT-PCR引物序列》

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《纤维化因子及NADPH氧化酶在心理应激诱导小鼠的食管纤维化中的表达及意义》

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注:NOX-4为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4；colla-1为胶原蛋白1；TGF-β1为转化生长因子β1；α-SMA为α-平滑肌肌动蛋白

采用实时定量RT-PCR检测食管组织中NOX-4及纤维化标志物[胶原蛋白1（collagen1，colla-1）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）]mRNA的表达。取每个标本食管组织30 mg，采用Trizol试剂提取总RNA，采用天根公司FastQuant RT试剂盒合成第一链cDNA。由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成引物，各指标及β-肌动蛋白（actin）引物序列和扩增产物长度见表1。实验严格按照试剂盒操作说明进行。反应体系为25μl，反应条件为:94℃3 min，然后95℃20 s，60℃20 s，72℃20 s，共40循环。反应结束后由电脑自动得出荧光曲线及CT值，采用2-△△Ct计算出CRS小鼠食管组织相对于对照组中目标基因的相对表达倍数。