《表1 实时荧光定量RT-PCR引物序列》
采用植物RNA提取试剂盒(Bioteke)分别提取刚毛柽柳叶组织和根组织总RNA。获得的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测其质量,并用核酸浓度测定仪测定其纯度和浓度。分别取1μg总RNA进行反转录,反转录反应体系和操作参照PrimerScript RT reagent Kit(Perfect Real Time)(TaKaRa)说明书。将反转录产物cDNA稀释10倍,用作实时荧光定量PCR反应模板。选择作为内参基因的是β-actin(FJ618517)、α-tubulin(FJ618518)和β-tubulin(FJ618519)。内参和Th ZFP1基因的引物序列见表1。实时荧光定量PCR反应体系:2×TransStart Top Green qPCR SuperMix 10μL、上游引物和下游引物(10μmol·L-1)各1μL、稀释后的模板cDNA 2μL,加灭菌去离子水补足体积至20μL。反应程序为:94°C预变性30 s;94°C变性12 s,58°C退火30 s,72°C延伸45 s,79°C读板1 s,45个循环。每个样品3次重复,反应在MJ Opticon 2仪器(BioRad Hercules,CA,USA)上完成。利用2-??Ct方法对基因的相对表达量进行分析(Livak和Schmittgen 2001)。
图表编号 | XD00181506600 严禁用于非法目的 |
---|---|
绘制时间 | 2020.04.20 |
作者 | 侯峥、赵鑫、李垚、王超 |
绘制单位 | 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室、东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室、东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室、东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |