《表1 SaUGT1, Sa UGT2基因无缝克隆引物》

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《欧洲花楸糖基转移酶基因的全长克隆与表达分析》

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基于无缝克隆技术原理，按照pEASY-Uni Seamless Cloning and Assembly Kit说明书，设计带BamHI酶切位点的cDNA无缝克隆引物，以cDNA为模板，见表1。根据KOD-Plus-Neo说明书配制PCR体系，distilled water 32μL，10×PCR Buffer for KOD-Plus-Neo5μL，2 mmol·L-1dNTPs 5μL，25 mmol·L-1MgSO43μL，正反向引物各2.5μL，cDNA 1μL，KOD-PlusNeo 1μL。反应程序:94℃2 min；98℃10 s，55℃30 s，72℃30 s，重复35个循环；72℃5 min。将PCR产物切胶回收后置于-20℃保存备用。