《表3 不同浓度的欧前胡素对肿瘤细胞内Rho 123的蓄积实验分组》

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《HPLC-FLD法测定欧前胡素对肿瘤耐药细胞悬液中罗丹明123含量的影响》

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按“2.1.3”项下方法培养各细胞，并接种于6孔细胞培养板中，过夜后，分别给予不同浓度的药物溶液或HBSS，置于37℃，5%CO2细胞培养箱中孵育，60 min后置于冰上终止反应（约10 min），1 000 r·min-1，4℃条件下离心5 min，弃去上清液，加入冰冷的HBSS清洗2次。每孔加入含5μg·m L-1 Rho 123的HBSS液1 mL，置于37℃，5%CO2细胞培养箱中孵育60 min，结束后，置于冰上终止反应（约10min），弃去上清液，加入冰冷的HBSS清洗2次。加入HBSS 500μL并用细胞刮轻轻地将细胞刮下来，置于1.5 mL EP管中，冻存于-80℃冰箱中以破碎细胞。反复冻融3次，12 000 r·min-1离心10 min后取上清液。按照“2.1.3”项下的处理方法处理样品，同时取适量的细胞悬液按照Bradford蛋白浓度测定方法进行蛋白定量。将每管细胞内的Rho 123浓度与相应每管的总蛋白含量相除，用以消除每管细胞数量所带来的误差。实验分组及加样顺序见表3。欧前胡素对不同肿瘤细胞中Rho 123含量的影响结果见表4、5。