《表2 ASPCR检测V106I突变的灵敏度与准确性》

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《等位基因特异扩增实时定量PCR检测HIV的V106I耐药突变位点的方法建立》


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ASPCR方法的灵敏度的检验。使用非特异性引物和特异性引物扩增突变模板比例为100%(106/106)~0.01%(100/106)的混合模板,每反应重复3次,得到相应的ΔCt值,100%~1%的混合模板ΔCt值均小于临界值,0.1%~0.01%的混合模板ΔCt值大于临界值。使用非特异性引物和特异性引物同时扩增突变模板比例为100%~0.01%的混合模板,根据标准曲线可以得到相应的模板拷贝数,进而计算出突变比例(突变比例=特异引物扩增得到的模板拷贝数/非特异引物扩增得到的模板拷贝数×100%),实际检测结果与理论值具有较好的吻合度,当理论突变比例<1%时,检测值将显著偏离理论值。因此最终确定ASPCR检测V106I耐药位点的灵敏度可达1%(表2)。